用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與PEN-2相互作用蛋白的初步研究.pdf

1、PEN-2蛋白(Presenilinenhancerprotein2)是一種與阿爾茨海默氏癥(Alzheimer'sDisease，AD)密切相關(guān)的蛋白。PEN-2在γ-分泌酶的組裝和成熟中扮演重要的角色，它對于AD途徑和Notch信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑起著調(diào)節(jié)作用。另外，也有報(bào)道PEN-2還具有促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活和防止其不被凋亡的作用。但是，這些研究結(jié)果還不足以充分闡明它在生理活動(dòng)中的功能及其作用機(jī)制。我們采用酵母雙雜交法篩選與它有相互作用的蛋白

2、，以便更好地認(rèn)識(shí)和理解PEN-2在阿爾茨海默氏癥病理過程中的機(jī)制。 以PEN-2為誘餌蛋白篩選人胎腦文庫后，我們得到25個(gè)陽性克隆。陽性克隆測序并將測序結(jié)果用BLAST分析，3，44，47，54號(hào)陽性克隆的氨基酸序列分別和人PCBP4[poly(rC)bindingprotein4]、TXNDC9(thioredoxindomaincontaining9)、FTL(ferritin，lightpolypeptide)和GRK5(

3、Gprotein-coupledreceptorkinase5)4種蛋白具有高度的同源性。β-半乳糖苷酶活性測定說明這4種蛋白在酵母AH109中可以與PEN-2發(fā)生相互作用。 在進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)中，我們成功地構(gòu)建了哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pCMV5-HA-PEN2，pCMV-myc-TXNDC9和pCMV-myc-FTL。其中TXNDC9和FTL融合蛋白在293T細(xì)胞中有效表達(dá)。 通過以上實(shí)驗(yàn)，我們認(rèn)為篩選出的4個(gè)蛋白在酵母中和PE

4、N-2之間存在相互作用；其中推測PCBP4可能參與了PEN-2在促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活方面的功能；而FTL在維持細(xì)胞內(nèi)鐵的穩(wěn)定性和中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)鐵的代謝平衡，防止在早老性癡呆中的腦內(nèi)局部鐵的異常積累有重要作用。我們還成功地構(gòu)建了兩種篩選出的蛋白的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體，為在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)驗(yàn)證它們和PEN-2是否存在相互作用奠定了基礎(chǔ)。這些發(fā)現(xiàn)有助于進(jìn)一步了解PEN-2的功能，同時(shí)也為阿爾茨海默氏癥的治療提供了新的思路。 本文的創(chuàng)新之處：