酵母雙雜交技術篩選與P53蛋白相互作用的新蛋白的研究.pdf

1、腫瘤抑制因子P53是一個轉錄因子，是細胞生長過程中主要的調(diào)控因子之一，在保持細胞基因組的完整性，抑制惡性腫瘤增殖中起到至關重要的作用。當細胞遭受不同程度的損傷時，P53選擇性地轉錄激活編碼細胞周期蛋白或促凋亡蛋白的基因，使細胞停滯于G1期，允許細胞進行自我修復，或啟動細胞程序性死亡，使細胞自殺，從而阻止有癌變傾向的突變細胞的生成。
　　 基因組脅迫能對細胞或生物組織造成嚴重的損傷，甚至能導致機體死亡?；蚪M脅迫的一種主要的來源是

2、細胞DNA損傷。細胞內(nèi)存在一個精細的信號網(wǎng)絡感知DNA損傷，調(diào)控細胞進行周期靜止，細胞凋亡，細胞衰老等生物學反應。而P53蛋白位于這個網(wǎng)絡的重要位置，它能通過被DNA損傷信號通路中的一系列激酶磷酸化而成為活化形式，轉錄下游靶基因，進而掌控細胞的命運。
　　 目前對P53蛋白功能的研究主要集中在P53對下游靶基因轉錄激活的選擇性的調(diào)控。以往的研究發(fā)現(xiàn)，存在一類P53結合蛋白，它們與P53蛋白的結合能影響P53轉錄靶基因的選擇性。為

3、了進一步探討P53的功能，我們采用酵母雙雜交技術篩選與P53相互作用的新蛋白。我們利用去掉N端轉錄激活結構域的P53作為誘餌蛋白篩選人骨髓cDNA文庫，最終得到99個陽性克隆，并首次發(fā)現(xiàn)一個帶有鋅指結構域和WD40結構域的新P53結合蛋白，我們以克隆號將其命名為207。有研究顯示該蛋白同時位于由DNA損傷引起的ATM/ATR信號通路中，是ATM/ATR激酶的底物。我們在哺乳動物細胞內(nèi)驗證了P53與207的結合，并通過熒光素酶活性實驗檢測

4、到207可以激活P53的轉錄活性。在用UV照射刺激的DNA損傷誘導下，我們發(fā)現(xiàn)207能穩(wěn)定P53蛋白水平，并一定程度提高P53下游靶蛋白BAX蛋白水平。我們還發(fā)現(xiàn)在U2OS細胞中，UV照射刺激的DNA損傷誘導207亞細胞定位的改變，由細胞核仁內(nèi)游離至整個細胞核中。
　　 我們的工作首次發(fā)現(xiàn)207蛋白與P53蛋白在細胞內(nèi)的結合，并初步探討了此種結合對P53的影響，發(fā)現(xiàn)了207蛋白在DNA損傷誘導P53功能調(diào)控中的潛在作用，為以后的