利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與mPem蛋白相作用的分子.pdf

1、　　Pem基因是同源異型框基因,它的表達(dá)具有明顯的時(shí)間和組織特異性。鼠胚發(fā)育的第6天,Pem開始在胚胎中表達(dá),第7-8天,Pem表達(dá)量達(dá)到最高,隨后迅速減少；而在胎盤和卵黃囊中,第7-8天時(shí)幾乎檢測(cè)不到Pem的轉(zhuǎn)錄,到了第9天大量表達(dá)并持續(xù)到分娩為止。Pem基因在成年組織中一般不表達(dá),但可在生殖組織中表達(dá),例如在附睪、睪丸和卵巢中表達(dá)。這充分表明Pem在胚胎發(fā)育和生殖組織中可能充當(dāng)著重要的角色。
　　為了進(jìn)一步研究Pem的功能,我

2、們利用酵母雙雜交系統(tǒng)對(duì)小鼠7天胚胎cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選,成功的得到了3個(gè)有意義的分子：Psap、Brpf1、Cdc37。
　　Brpf1基因(bromodomain and PHD finger containing 1)含有1個(gè)保守的溴結(jié)構(gòu)域(bromodomain)、兩個(gè)PHD鋅指結(jié)構(gòu)和1個(gè)PWWP模序。經(jīng)過(guò)初步的生物信息學(xué)分析,我們推測(cè)：在胚胎發(fā)育的特定階段和生殖組織中,mPem特異性表達(dá)。在mPem形成特定的空間結(jié)構(gòu)后,B

3、rpf1的第一個(gè)PHD鋅指結(jié)構(gòu)與mPem結(jié)合,兩者發(fā)生相互作用,從而使Brpf1的另一個(gè)PHD鋅指結(jié)構(gòu)和bromodomain與核小體結(jié)合,構(gòu)象發(fā)生變化的核小體募集轉(zhuǎn)錄相關(guān)蛋白與DNA模板上啟動(dòng)子結(jié)合,促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄,最終導(dǎo)致細(xì)胞分化或其他一系列事件的發(fā)生。
　　Psap(Prosaposin)基因的表達(dá)與mPem的表達(dá)在空間上相吻合,他們可能在雄性生殖器官的發(fā)生、細(xì)胞分化中起著舉足輕重的作用。
　　mPem蛋白與Cdc37伴