氨溴索對伏立康唑和美羅培南在小鼠肺組織分布的影響及其口服與霧化藥動學的比較.pdf

1、第一部分不同劑量鹽酸氨溴索對伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中分布的影響
　　目的：
　　建立小鼠血漿及肺組織中伏立康唑的HPLC測定方法，通過比較低、中、高三種不同劑量鹽酸氨溴索與伏立康唑聯(lián)用后，伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中藥動學參數的變化，考察不同劑量鹽酸氨溴索對伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中分布的影響。
　　方法：
　　色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動相為乙

2、腈-0.01mol·L-1磷酸二氫鉀（三乙胺調pH至6.26）（47:53），流速1.0 mL·min-1，柱溫30℃，檢測波長為254 nm，進樣量10μL，內標為鹽酸地爾硫。將240只健康昆明雄性小鼠，隨機分為對照組和實驗組，其中實驗組包括低、中、高3個劑量組。對照組灌胃給予伏立康唑66.67 mg·kg-1，各實驗組則灌胃給予等量伏立康唑與不同劑量鹽酸氨溴索（分別為10 mg·kg-1、50 mg·kg-1和150 mg·kg-1

3、）。四組小鼠分別在給藥后不同時間點摘眼球取血，離心后得血漿樣品。將其肺部組織，充分研磨后離心，取上清液得肺組織勻漿樣品。血漿樣品采用乙腈沉淀蛋白法處理，肺組織勻漿樣品則采用乙酸乙酯-二氯甲烷（75:25）萃取。應用DAS2.1.1軟件擬合藥動學參數，SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　經方法學驗證，血漿及肺組織中伏立康唑在各自線性范圍內線性關系良好，標準曲線分別為Y1=0.043 X1－0.012（r=0.

4、9996）（2~64μg·mL-1）與Y2=0.303 X2＋0.119（r=0.9992）（0.4~12.8μg·mL-1）；平均回收率分別為83.59％~94.80%和73.12%~77.67%；日內、日間精密度RSD值均小于15%；反復凍融3次、低溫保存20天及處理后室溫放置8 h，樣品均穩(wěn)定，對其測定無影響。血漿及肺組織中伏立康唑的主要藥動學參數AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、Tmax、CL、V、Cmax在四組間均無顯著差

5、異（P>0.05）。
　　結論：
　　本法專屬性好，靈敏度、準確性與回收率較高，可用于小鼠血漿及肺組織中伏立康唑濃度的測定。不同劑量鹽酸氨溴索與伏立康唑合用后對伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中分布均無影響。
　　第二部分不同劑量鹽酸氨溴索對美羅培南在小鼠肺組織中分布的影響
　　目的：
　　采用液相色譜-質譜串聯(lián)技術（LC-MS/MS），建立測定小鼠肺組織中美羅培南含量的方法，并探討不同劑量鹽酸氨溴索與美羅培南聯(lián)

6、合用藥時，鹽酸氨溴索對美羅培南在小鼠肺部分布的影響。
　　方法：
　　Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進行分離，流動相為乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，內標為厄他培南。電噴霧離子化源（ESI），正負離子切換。多反應監(jiān)測（MRM）方式進行定量分析，用于定量分析的離子對分別為美羅培南m/z384.1→141.2，內標厄他培南m/z474.4→265.2。將144

7、只小鼠隨機分為對照組、低劑量組與高劑量組。低、高劑量組尾靜脈給予不同劑量鹽酸氨溴索，對照組則給予等量生理鹽水，而后三組實驗動物均尾靜脈給予等量美羅培南。于給藥后不同時間點摘眼球放血，并取肺組織制備組織勻漿樣品。采用LC-MS/MS法測定肺組織中美羅培南的濃度，應用DAS2.1.1軟件擬合藥動學參數，SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　小鼠肺組織中美羅培南在標線范圍內呈良好線性關系，回歸方程為Y=0.0150

8、7 X+0.01348（r=0.9997）(15.625~2000 ng·mL-1)；平均回收率為98.05%~102.5%；基質效應為90.93%~104.3%；同時，經驗證精密度、穩(wěn)定性、稀釋效應等均符合生物樣品測定要求。藥動學實驗結果表明，三組間的藥動學參數AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、Tmax、CL、V、Cmax均無顯著性差異(P>0.05)。
　　結論：
　　本實驗建立高效液相色譜-質譜串聯(lián)法測定小鼠肺內美

9、羅培南含量的方法，操作簡便，分析時間較短，準確度高，專屬性良好?？捎糜跍y定肺組織中美羅培南的含量。實驗結果表明，不同劑量鹽酸氨溴索與美羅培南合用后，對小鼠肺組織中美羅培南分布無影響。
　　第三部分鹽酸氨溴索口服與霧化吸入在小鼠肺組織中的藥動學比較
　　目的：
　　采用LC-MS/MS技術，建立測定小鼠血漿及肺內鹽酸氨溴索含量的方法。同時，考察鹽酸氨溴索口服與霧化吸入不同給藥途徑在小鼠血漿及肺部藥動學。
　　方法：

10、
　　Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進行分離，流動相為乙腈-5 mmol·L-1乙酸銨（0.1%甲酸）（37:64），流速1.0 mL·min-1，柱溫35℃，內標為磺胺甲噁唑。電噴霧離子化源（ESI），正離子監(jiān)測。多反應監(jiān)測（MRM）方式進行定量分析，用于定量分析的離子對分別為鹽酸氨溴索m/z379→263.7，內標磺胺甲噁唑m/z254.2→155.8。144只昆明小鼠隨機分為對照組與實

11、驗組，每組72只。對照組采用口服灌胃方式，實驗組采用霧化吸入給藥方式，兩組實驗動物均給予小鼠等量鹽酸氨溴索(4.5 mg·kg-1)。于給藥后不同時間點摘眼球取血，離心后得血漿樣品。取其肺組織制備肺組織勻漿樣品。血漿與肺組織勻漿樣品均采用乙腈沉淀蛋白法處理。采用DAS2.1.1軟件擬合藥動學參數，SPSS21.0軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　結果：
　　口服給藥后，小鼠血漿及肺組織中Cmax值分別為138.57±52.21、36

12、1.48±103.54 ng·mL-1，AUC0-∞值分別為741.05±136.90、1482.41±427.25 ng·h·mL-1；霧化給藥后，Cmax值分別為7419.67±3224.4、3415.33±941.94 ng·mL-1，AUC0-∞值分別為10113.16±2032.61、10153.26±1439.80 ng·h·mL-1。血漿及肺內Cmax值與AUC0-∞值在兩組間均有顯著性差異（P<0.05）。
　　結