氨溴索對(duì)伏立康唑和美羅培南在小鼠肺組織分布的影響及其口服與霧化藥動(dòng)學(xué)的比較.pdf

1、第一部分不同劑量鹽酸氨溴索對(duì)伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中分布的影響
　　目的：
　　建立小鼠血漿及肺組織中伏立康唑的HPLC測(cè)定方法，通過(guò)比較低、中、高三種不同劑量鹽酸氨溴索與伏立康唑聯(lián)用后，伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的變化，考察不同劑量鹽酸氨溴索對(duì)伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中分布的影響。
　　方法：
　　色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙

2、腈-0.01mol·L-1磷酸二氫鉀（三乙胺調(diào)pH至6.26）（47:53），流速1.0 mL·min-1，柱溫30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，進(jìn)樣量10μL，內(nèi)標(biāo)為鹽酸地爾硫。將240只健康昆明雄性小鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，其中實(shí)驗(yàn)組包括低、中、高3個(gè)劑量組。對(duì)照組灌胃給予伏立康唑66.67 mg·kg-1，各實(shí)驗(yàn)組則灌胃給予等量伏立康唑與不同劑量鹽酸氨溴索（分別為10 mg·kg-1、50 mg·kg-1和150 mg·kg-1

3、）。四組小鼠分別在給藥后不同時(shí)間點(diǎn)摘眼球取血，離心后得血漿樣品。將其肺部組織，充分研磨后離心，取上清液得肺組織勻漿樣品。血漿樣品采用乙腈沉淀蛋白法處理，肺組織勻漿樣品則采用乙酸乙酯-二氯甲烷（75:25）萃取。應(yīng)用DAS2.1.1軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，血漿及肺組織中伏立康唑在各自線(xiàn)性范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)分別為Y1=0.043 X1－0.012（r=0.

4、9996）（2~64μg·mL-1）與Y2=0.303 X2＋0.119（r=0.9992）（0.4~12.8μg·mL-1）；平均回收率分別為83.59％~94.80%和73.12%~77.67%；日內(nèi)、日間精密度RSD值均小于15%；反復(fù)凍融3次、低溫保存20天及處理后室溫放置8 h，樣品均穩(wěn)定，對(duì)其測(cè)定無(wú)影響。血漿及肺組織中伏立康唑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、Tmax、CL、V、Cmax在四組間均無(wú)顯著差

5、異（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　本法專(zhuān)屬性好，靈敏度、準(zhǔn)確性與回收率較高，可用于小鼠血漿及肺組織中伏立康唑濃度的測(cè)定。不同劑量鹽酸氨溴索與伏立康唑合用后對(duì)伏立康唑在小鼠血漿及肺組織中分布均無(wú)影響。
　　第二部分不同劑量鹽酸氨溴索對(duì)美羅培南在小鼠肺組織中分布的影響
　　目的：
　　采用液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)技術(shù)（LC-MS/MS），建立測(cè)定小鼠肺組織中美羅培南含量的方法，并探討不同劑量鹽酸氨溴索與美羅培南聯(lián)

6、合用藥時(shí)，鹽酸氨溴索對(duì)美羅培南在小鼠肺部分布的影響。
　　方法：
　　Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸水，梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，內(nèi)標(biāo)為厄他培南。電噴霧離子化源（ESI），正負(fù)離子切換。多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式進(jìn)行定量分析，用于定量分析的離子對(duì)分別為美羅培南m/z384.1→141.2，內(nèi)標(biāo)厄他培南m/z474.4→265.2。將144

7、只小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、低劑量組與高劑量組。低、高劑量組尾靜脈給予不同劑量鹽酸氨溴索，對(duì)照組則給予等量生理鹽水，而后三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均尾靜脈給予等量美羅培南。于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)摘眼球放血，并取肺組織制備組織勻漿樣品。采用LC-MS/MS法測(cè)定肺組織中美羅培南的濃度，應(yīng)用DAS2.1.1軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　小鼠肺組織中美羅培南在標(biāo)線(xiàn)范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系，回歸方程為Y=0.0150

8、7 X+0.01348（r=0.9997）(15.625~2000 ng·mL-1)；平均回收率為98.05%~102.5%；基質(zhì)效應(yīng)為90.93%~104.3%；同時(shí)，經(jīng)驗(yàn)證精密度、穩(wěn)定性、稀釋效應(yīng)等均符合生物樣品測(cè)定要求。藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，三組間的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)AUC0-t、AUC0-∞、t1/2、Tmax、CL、V、Cmax均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)法測(cè)定小鼠肺內(nèi)美

9、羅培南含量的方法，操作簡(jiǎn)便，分析時(shí)間較短，準(zhǔn)確度高，專(zhuān)屬性良好?？捎糜跍y(cè)定肺組織中美羅培南的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量鹽酸氨溴索與美羅培南合用后，對(duì)小鼠肺組織中美羅培南分布無(wú)影響。
　　第三部分鹽酸氨溴索口服與霧化吸入在小鼠肺組織中的藥動(dòng)學(xué)比較
　　目的：
　　采用LC-MS/MS技術(shù)，建立測(cè)定小鼠血漿及肺內(nèi)鹽酸氨溴索含量的方法。同時(shí)，考察鹽酸氨溴索口服與霧化吸入不同給藥途徑在小鼠血漿及肺部藥動(dòng)學(xué)。
　　方法：

10、
　　Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相為乙腈-5 mmol·L-1乙酸銨（0.1%甲酸）（37:64），流速1.0 mL·min-1，柱溫35℃，內(nèi)標(biāo)為磺胺甲噁唑。電噴霧離子化源（ESI），正離子監(jiān)測(cè)。多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）方式進(jìn)行定量分析，用于定量分析的離子對(duì)分別為鹽酸氨溴索m/z379→263.7，內(nèi)標(biāo)磺胺甲噁唑m/z254.2→155.8。144只昆明小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組與實(shí)

11、驗(yàn)組，每組72只。對(duì)照組采用口服灌胃方式，實(shí)驗(yàn)組采用霧化吸入給藥方式，兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均給予小鼠等量鹽酸氨溴索(4.5 mg·kg-1)。于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)摘眼球取血，離心后得血漿樣品。取其肺組織制備肺組織勻漿樣品。血漿與肺組織勻漿樣品均采用乙腈沉淀蛋白法處理。采用DAS2.1.1軟件擬合藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　口服給藥后，小鼠血漿及肺組織中Cmax值分別為138.57±52.21、36

12、1.48±103.54 ng·mL-1，AUC0-∞值分別為741.05±136.90、1482.41±427.25 ng·h·mL-1；霧化給藥后，Cmax值分別為7419.67±3224.4、3415.33±941.94 ng·mL-1，AUC0-∞值分別為10113.16±2032.61、10153.26±1439.80 ng·h·mL-1。血漿及肺內(nèi)Cmax值與AUC0-∞值在兩組間均有顯著性差異（P<0.05）。
　　結(jié)