基于抑郁癥PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路研究疏肝和胃湯的抗抑郁作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　抑郁癥逐漸成為現(xiàn)代社會的常見及高發(fā)疾病，給社會和患者的生活都帶來了巨大的壓力，但抑郁癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，明確抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，對于抑郁癥的診治至關(guān)重要。本研究以中醫(yī)“肝郁”與抑郁癥的相似性為切入點(diǎn)，基于抑郁模型PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路的病理生理變化，旨在闡釋中醫(yī)“肝郁”發(fā)生的中樞機(jī)制，并通過觀察疏肝和胃湯對抑郁模型PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路的影響作用研究其抗抑郁機(jī)制，為深入研究中醫(yī)藥治療抑郁癥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、
　　方法：
　　1.理論研究：采用文獻(xiàn)分析法，歸納古今醫(yī)家對抑郁癥相關(guān)病證的臨床辨治規(guī)律，并梳理《傷寒雜病論》中抑郁癥相關(guān)病證的辨治規(guī)律，分析中醫(yī)肝郁與抑郁癥的相關(guān)性；通過整理PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路與抑郁癥發(fā)病的聯(lián)系，分析中醫(yī)肝郁的中樞機(jī)制與PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路的相關(guān)性。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究：①模型制作及評價：采用慢性不可預(yù)知性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)法造模4w，造模完成后給予三種不同濃度疏肝和胃湯及氟西汀干預(yù)7

3、d，并運(yùn)用曠場實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)評價。
　　②神經(jīng)環(huán)路相關(guān)指標(biāo)的檢測：采用尼氏染色法觀察抑郁模型大鼠PFC腦區(qū)切片的病理改變，并統(tǒng)計 PFC區(qū)正常神經(jīng)元的數(shù)目；采用高效液相法分別檢測抑郁模型大鼠 PFC、NAc及 VTA三個腦區(qū)中DA、GABA、Glu含量；采用RT-PCR檢測抑郁模型大鼠NAc區(qū)PSD95 mRNA、NR2B mRNA的相對表達(dá)量;采用western blot檢測抑郁模型大鼠NAc區(qū)PSD95、NR2B

4、的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.理論研究：古代醫(yī)家認(rèn)為，抑郁癥與情志之郁證關(guān)系密切，可兼夾諸郁，又涉及臟腑功能紊亂及氣血津液的失調(diào)。現(xiàn)代臨床辨證規(guī)律研究顯示，情志失調(diào)為抑郁癥的主要病因，肝失疏泄為抑郁癥病機(jī)核心，以影響及心、脾、胃等多臟腑為抑郁癥的傳變特點(diǎn)，以氣血津液陰陽失調(diào)為抑郁癥的病理變化特點(diǎn)，治法以疏肝解郁，調(diào)暢氣機(jī)為主?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為抑郁癥的發(fā)病機(jī)制與PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路的功能失調(diào)相關(guān)，因此可以從PFC-

5、NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路為切入點(diǎn)探討“肝郁”的中樞機(jī)制。
　　2.實(shí)驗(yàn)研究：
　　實(shí)驗(yàn)一：疏肝和胃湯對抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響
　?、倌Ｐ徒M曠場實(shí)驗(yàn)靜止時間延長，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組靜止時間縮短，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、谀Ｐ徒M曠場實(shí)驗(yàn)總運(yùn)動距離縮短，與空白組比

6、較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組總運(yùn)動距離增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中劑量組總運(yùn)動距離較氟西汀組長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、勰Ｐ徒M曠場實(shí)驗(yàn)中央?yún)^(qū)域穿越格數(shù)減少，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯中、高劑量組及氟西汀組中央?yún)^(qū)域穿越格數(shù)增多，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)

7、意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中、高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、苣Ｐ徒M強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動時間延長，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組不動時間縮短，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中、高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　實(shí)驗(yàn)二：疏肝和胃湯對抑郁模型大鼠PFC區(qū)病理變化的影響
　?、俟?/p>

8、鏡下尼氏小體呈深藍(lán)色或紫藍(lán)色，多為塊狀或細(xì)顆粒狀，分布于核周圍或樹突內(nèi)，尼氏體靠近胞體周圍處較為明顯?？瞻捉MPFC 區(qū)神經(jīng)元數(shù)目較多，尼氏小體顏色較深，分布于細(xì)胞核周圍。神經(jīng)元細(xì)胞形態(tài)飽滿，結(jié)構(gòu)完整，邊緣清晰；模型組 PFC區(qū)神經(jīng)元數(shù)目相對較少，尼氏小體顏色較淡，分布疏松，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，結(jié)構(gòu)不完整，尼氏小體數(shù)目減少或消失，部分細(xì)胞核偏向一側(cè)，細(xì)胞腫大，出現(xiàn)空泡區(qū)；經(jīng)過治療藥物干預(yù)后，各治療組尼氏小體數(shù)目較模型組增多但少于空白

9、組，較模型組尼氏小體顏色更深，結(jié)構(gòu)較完整、清晰。
　?、谀Ｐ徒M PFC區(qū)正常神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組PFC區(qū)正常神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量增加，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中、高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　實(shí)驗(yàn)三：疏肝和胃湯對抑郁模型大鼠PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路中DA、GABA、Glu含量的影響

10、r>　?、貾FC區(qū)中，模型組DA含量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯中、高劑量組及氟西汀組DA含量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　NAc區(qū)中，模型組DA含量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組DA含量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0

11、5或P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　VTA區(qū)中，模型組DA含量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯低、中劑量組及氟西汀組DA含量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯低、中劑量組DA含量較氟西汀組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　?、赑FC區(qū)中，模型組Glu含量升高，與空白組比較差異有

12、統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組Glu含量降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中劑量組Glu含量較氟西汀組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），低、高劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　NAc區(qū)中，模型組Glu含量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯中劑量組及氟西汀組Glu含量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01

13、）；其中，疏肝和胃湯中劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　VTA區(qū)中，模型組 Glu含量升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組Glu含量降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯各劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、跴FC區(qū)中，模型組 GABA含量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.

14、01）；疏肝和胃湯中劑量組及氟西汀組 GABA含量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　NAc區(qū)中，模型組GABA含量升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯中、高劑量組 GABA含量降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中、高劑量組與氟西汀組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

15、r>　　VTA區(qū)中，模型組GABA含量升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯中劑量組及氟西汀組 GABA含量降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　實(shí)驗(yàn)四：疏肝和胃湯對抑郁模型大鼠 NAc區(qū) PSD95 mRNA和NR2B mRNA表達(dá)的影響
　?、倌Ｐ徒MNAc區(qū)PSD95 mRNA的相對表達(dá)量降低，與空白組比

16、較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組NAc區(qū)PSD95 mRNA的相對表達(dá)量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中、高劑量組 PSD95 mRNA的相對表達(dá)量高于氟西汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；低劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、谀Ｐ徒MNAc區(qū)NR2B mRNA的相對表達(dá)量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；疏肝和

17、胃湯各劑量組及氟西汀組NAc區(qū)NR2B mRNA的相對表達(dá)量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯各劑量組NAc區(qū)NR2B mRNA的相對表達(dá)量高于氟西汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　實(shí)驗(yàn)五：疏肝和胃湯對抑郁模型大鼠NAc區(qū)PSD95和NR2B表達(dá)的影響
　?、倌Ｐ徒MNAc區(qū)PSD95相對表達(dá)量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組 PSD

18、95相對表達(dá)量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯中、高劑量組 PSD95相對表達(dá)量高于氟西汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），低劑量組與氟西汀組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　?、谀Ｐ徒MNAc區(qū)NR2B相對表達(dá)量降低，與空白組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；疏肝和胃湯各劑量組及氟西汀組NR2B相對表達(dá)量升高，與模型組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；其中，疏肝和胃湯低、中

19、劑量組NR2B相對表達(dá)量高于氟西汀組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.古代醫(yī)家所論之?郁?涉及范圍較廣，包括五運(yùn)六氣之郁、臟腑之郁及情志之郁等，至明清以后專論郁證，才與現(xiàn)代抑郁之?郁?聯(lián)系緊密。
　　2.近十年來抑郁癥的中醫(yī)病因及證候分布規(guī)律研究顯示，情志失調(diào)為抑郁癥的主要病因，肝失疏泄為其病機(jī)核心，以影響及心、脾、胃等多臟腑為其傳變特點(diǎn)，以氣血津液陰陽失調(diào)為其病理變化特點(diǎn)，治法以疏肝解郁，調(diào)暢

20、氣機(jī)為主。
　　3.慢性應(yīng)激引起的PFC區(qū)神經(jīng)元病理改變，PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路DA含量的降低、Glu含量的升高、GABA含量的相應(yīng)改變，以及NAc區(qū)突觸相關(guān)蛋白PSD95、NR2B及其mRNA表達(dá)的下降，可能是抑郁癥的發(fā)病機(jī)制。
　　4.疏肝和胃湯能夠改善抑郁模型大鼠的抑郁狀態(tài)，并且能減輕抑郁模型大鼠PFC區(qū)神經(jīng)元的受損程度，調(diào)節(jié)PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路中 DA、Glu、GABA含量的異常上升或下降，且能夠逆

21、轉(zhuǎn)模型大鼠NAc區(qū)突觸相關(guān)蛋白PSD95、NR2B及其mRNA的異常下調(diào)，提示疏肝和胃湯可能是通過對PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路中上述指標(biāo)的調(diào)節(jié)發(fā)揮抗抑郁作用的。
　　5.中醫(yī)“肝郁”發(fā)生的中樞機(jī)制可能與PFC區(qū)神經(jīng)元病理變化， PFC-NAc-VTA神經(jīng)環(huán)路中 DA、Glu、GABA的異常表達(dá)以及 NAc區(qū)突觸相關(guān)蛋白PSD95、NR2B及其mRNA的異常下調(diào)有關(guān)。
　　6.研究結(jié)果提示，疏肝和胃湯發(fā)揮抗抑郁作用的潛在機(jī)