美洲大蠊抗腫瘤活性成分及其結腸定位片的研究.pdf

1、美洲大蠊Periplaneta americana（L.）為昆蟲綱（Insecta），蜚蠊目(Blattodea)，蜚蠊科(Blattaria)昆蟲的干燥全體。具有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效，含有蛋白質、氨基酸、肽類、糖類等多種有效成分，現(xiàn)代研究表明，在抗癌、提高免疫力、治療心血管疾病、修復皮膚等方面具有顯著的作用。本論文在文獻及前期工作基礎上，以美洲大蠊為研究對象，富集純化其多肽類抗腫瘤活性成分，再根據(jù)多肽類成分在胃腸道中易被

2、酸解、酶解而失去藥效的性質，采用新技術、新工藝將其研制成pH敏感型口服結腸定位片，主要研究內容如下：
　　1.美洲大蠊抗腫瘤有效部位的制備工藝研究：采用指標成分含量檢測結合體外腫瘤細胞抑制試驗，確定了美洲大蠊有效部位的制備工藝條件為：取美洲大蠊藥材粗粉，石油醚除脂后，用10倍量90％的乙醇浸泡48h，以3ml/min/kg的速度進行滲漉，收集滲漉液，濾過，濾液在50℃～60℃減壓濃縮至1:1（ml:g），藥液通過HP20大孔樹脂，

3、用2BV70%的乙醇進行洗脫，收集70%乙醇洗脫液，并在50℃～60℃下減壓濃縮至1:2（ml:g），冷凍干燥即得多肽類凍干粉。
　　2.美洲大蠊凍干粉的初步質量標準研究：采用紫外-可見分光光度法對凍干粉中氨基酸、多肽含量進行測定；HPLC法對尿嘧啶、次黃嘌呤、肌酐含量進行測定；對凍干粉中氨基酸的種類和含量進行檢測；Tricine-SDS-PAGE凝膠電泳測定了凍干粉中多肽的分子量，初步建立了美洲大蠊多肽類凍干粉的質量標準。

4、>　　3.美洲大蠊凍干粉的抗腫瘤作用及其機制的研究：在前期研究的基礎上，對其體內抗腫瘤活性、荷瘤小鼠免疫功能及對SMMC-7721細胞凋亡的影響進行了研究。結果表明：美洲大蠊凍干粉各劑量組能抑制荷H22和S180瘤小鼠腫瘤生長，同時能提高荷瘤機體的免疫功能；可明顯誘導SMMC-7721細胞凋亡，抑制其增殖，呈現(xiàn)出一定的量效關系，其機制可能與下調Bcl-2蛋白表達，上調Bax蛋白表達，降低Bcl-2/Bax比值有關，初步揭示了美洲大蠊抗腫

5、瘤的作用機制。
　　4.美洲大蠊凍干粉結腸定位片的制備研究：根據(jù)美洲大蠊抗腫瘤活性多肽的性質，為避免多肽成分在胃腸道中易被酸解、酶解而失去藥效，選擇pH敏感型包衣材料Eudragit S100將凍干粉制成結腸定位片劑，有利于藥物的吸收，發(fā)揮持久的藥效。在制備合格素片的基礎上，以肌酐的累積釋放度為指標，確定具有結腸定位的包衣處方及包衣工藝參數(shù)，制備了美洲大蠊結腸定位片。三批樣品藥物的釋放行為相似，達到結腸定位釋放的目的，對樣品的釋藥

6、曲線進行模型擬合，發(fā)現(xiàn)美洲大蠊凍干粉結腸定位片的體外釋藥行為符合威布爾模型。
　　本論文對美洲大蠊抗腫瘤活性多肽進行初步分離，制備了美洲大蠊抗腫瘤活性部位；建立了凍干粉的初步質量標準；對其進行抗腫瘤機制的研究，成功研制了pH依賴型口服結腸定位片，經(jīng)體外釋放度試驗證明能準確定位到結腸，并滿足藥物溶出的要求，以期為臨床提供高效、低毒、多樣的用藥選擇。
　　創(chuàng)新點：
　　1.思路創(chuàng)新
　　本論文從美洲大蠊抗腫瘤有效部位

7、的提取與純化，凍干粉的制備，初步質量標準的建立，抗腫瘤作用及其機制的探討，結腸定位片的研制，形成“提取工藝—化學成分—藥效作用—成型工藝”的系統(tǒng)研究，為深入研究動物類中藥新制劑提供新思路，具有創(chuàng)新性。
　　2.方法創(chuàng)新
　　本論文采用化學指標與藥效學實驗指標相結合，對美洲大蠊抗腫瘤活性成分進行富集和純化工藝；采用western-blot法、Elisa法、Hoechst33342/PI雙染法、Annexin V-FITC/PI

8、雙染法等分析方法對美洲大蠊有效部位體內外抗腫瘤作用及機制進行研究。在制備結腸定位片中，采用肌酐溶出度結合f2相似因子法對比不同處方、工藝條件的累積釋放曲線，對其體外釋藥相似性進行評價，為動物類中藥美洲大蠊結腸定位釋放研究提供新方法，具有創(chuàng)新性。
　　3.應用創(chuàng)新
　　本論文通過體內抗腫瘤活性、荷瘤小鼠免疫功能及對體外腫瘤細胞凋亡的影響初步揭示其抗腫瘤作用的機制，為其抗腫瘤藥物的開發(fā)奠定基礎；美洲大蠊抗腫瘤成分為多肽類活性成分