阿侖磷酸鈉和骨碎補(bǔ)對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨愈合的影響及骨碎補(bǔ)巴布膏研制.pdf

1、目的:
　　研究骨碎補(bǔ)總酮、阿侖膦酸鈉及骨碎補(bǔ)總酮阿侖膦酸鈉二者合用對(duì)維甲酸所致的雌性SD大鼠骨質(zhì)疏松性骨折的骨折愈合及骨生物力學(xué)的影響;以及對(duì)骨碎補(bǔ)總酮巴布膏進(jìn)行初步的研制。
　　方法:
　?。ㄒ唬?、骨碎補(bǔ)總酮對(duì)雌性SD大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合及骨生物力學(xué)影響的
　　實(shí)驗(yàn)研究
　　40只雌性SD大鼠被隨機(jī)分成2組，對(duì)照組5只用相同容量的生理鹽水灌胃，骨質(zhì)疏松組35只運(yùn)用維甲酸濃度為80mg.kg-1.d-1

2、灌胃制造雌性SD大鼠實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松模型，連續(xù)灌胃15天后，骨質(zhì)疏松組隨機(jī)選擇5只與對(duì)照組5只一起行骨密度檢查確認(rèn)骨質(zhì)疏松造膜成功后，將剩余30只大鼠按隨機(jī)原則被分成2組，每組各15只。麻醉后，消毒鋪巾，切開暴露右側(cè)股骨，將右股骨截骨造成橫行骨折，同時(shí)用φ1.0mm克氏針行股骨髓內(nèi)固定，二組大鼠分別在術(shù)后第2日開始給予灌胃，對(duì)照組:生理鹽水8ml.kg-1.d-1，骨碎補(bǔ)總酮組:90mg.kg-1.d-1，分別在骨折髓內(nèi)固定術(shù)后2周、4周

3、和6周每組各選5只試驗(yàn)大鼠麻醉后用頸椎脫位法處死并行x線檢查和骨痂測(cè)量，同時(shí)取大鼠右側(cè)股骨骨痂標(biāo)本行組織學(xué)檢查以了解骨碎補(bǔ)總酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松性大鼠骨折愈合的影響，另取大鼠左側(cè)股骨全長(zhǎng)標(biāo)本給予生物力學(xué)測(cè)試以了解骨碎補(bǔ)總酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松性大鼠的骨生物力學(xué)影響。
　?。ǘ?、阿侖膦酸鈉和骨碎補(bǔ)總酮對(duì)SD大鼠骨質(zhì)疏松性骨折愈合及骨生物力學(xué)影響的試驗(yàn)研究
　　70只雌性SD大鼠根據(jù)隨機(jī)原則被分成2組，對(duì)照組5只用2ml/d的生理鹽

4、水灌胃，骨質(zhì)疏松組65只大鼠用維甲酸濃度為80mg.kg-1.d-1灌胃制造雌性SD大鼠實(shí)驗(yàn)性骨質(zhì)疏松模型。在連續(xù)灌胃15天后，骨質(zhì)疏松組隨機(jī)選擇5只與對(duì)照組5只一起行小動(dòng)物骨密度儀檢查骨密度，確認(rèn)骨質(zhì)疏松造膜成功后，將剩余65只大鼠按隨機(jī)原則被分成4組，每組各15只。用水合氯醛腹腔注射加利多卡因麻醉后，剃毛局部切開，暴露右側(cè)股骨中上段，將右股骨骨折截骨造成橫行骨折，同時(shí)用φ1.0mm克氏針行髓內(nèi)固定，術(shù)后給予換藥和注射抗生素3天預(yù)防感

5、染，并分別在術(shù)后第二日開始給予灌胃，阿侖膦酸鈉組:阿侖膦酸鈉組40mg/kg.w;骨碎補(bǔ)總酮組:骨碎補(bǔ)總酮90mg/kg.d;二者合用組:阿侖膦酸鈉組40mg/kg.w和骨碎補(bǔ)總酮90mg/kg.d;對(duì)照組:生理鹽水8ml/kg.w灌胃。分別在骨折內(nèi)固定術(shù)后2周，4周，6周從每組中隨機(jī)抽取5只，水合氯醛麻醉頸椎脫位法處死大鼠后行X線檢查、PACS系統(tǒng)X線骨痂測(cè)量及取右側(cè)股骨骨痂標(biāo)本行組織學(xué)檢查來(lái)評(píng)估阿侖膦酸鈉，骨碎補(bǔ)總酮及二者合用對(duì)維甲

6、酸酸所致的雌性SD大鼠骨質(zhì)疏松性骨折骨愈合過(guò)程的影響;另取左側(cè)股骨全長(zhǎng)給予生物力學(xué)測(cè)試以了解阿侖膦酸鈉、骨碎補(bǔ)總酮以及二者合用對(duì)維甲酸酸所致的雌性SD大鼠骨質(zhì)疏松骨的生物力學(xué)性能影響。
　?。ㄈ?、骨碎補(bǔ)總酮巴布膏的研制
　　提取骨碎補(bǔ)總酮，以阿拉伯膠、西黃耆膠、甘油、壓敏膠、氧化鋅按2.0∶2.0∶4.0∶0.6∶0.1的最佳配比做成巴布膏基質(zhì)，并加入透皮促進(jìn)劑:以氮酮與丙二醇共同作為促透劑，且兩者用量均為4％。制備工藝按

7、照以下步驟:(1)醇提:取處方骨碎補(bǔ)總酮藥材粉碎成粗顆粒(10目)，加入95％乙醇，提取3次，第1次2小時(shí)，第2次1小時(shí)，第3次40分鐘，趁熱過(guò)濾，合并醇液，回收乙醇濃縮成浸膏(相對(duì)密度1.23)備用。(2)基質(zhì)的制備:取阿拉伯膠、西黃耆膠、壓敏膠、氧化鋅按加適量水溶脹，加熱使溶解，在50度水浴中，不斷攪拌，依次加入氧化鋅、以及氮酮、丙二醇和甘油三者混合物（氮酮、丙二醇、甘油在研缽中研均勻）混合均勻即得。(3)制膏及涂布:取中藥提取浸膏

8、與基質(zhì)透皮劑在50度水浴恒溫加熱，攪拌20-40分鐘混合均勻，將其涂于無(wú)紡布上，蓋襯，剪成8*10大?。科嗨幹亓?0g）。
　　按以下制備工藝進(jìn)行
　　巴布劑制備工藝主要包括基質(zhì)成型工藝和制劑成型工藝初步制作骨碎補(bǔ)總酮巴布膏，基本過(guò)程如下。
　　主藥支持層背襯層↘↘↘基質(zhì)→膏體層→涂布→裁剪→包裝→成品
　　結(jié)果:
　?。ㄒ唬┥锪W(xué)結(jié)果:(1)彈性比率:SD大鼠骨質(zhì)疏松性骨折內(nèi)固定術(shù)后2周時(shí)，阿侖膦酸

9、鈉和骨碎補(bǔ)總酮二者合用比單用骨碎補(bǔ)組可明顯增強(qiáng)其骨骼的彈性比率P=0.022;阿侖膦酸鈉組較對(duì)照組能增強(qiáng)骨骼彈性比率P＜0.05。(2)最大載荷:骨碎補(bǔ)總酮，阿侖膦酸鈉及二者合用均能在骨折固定術(shù)后4周時(shí)能有效改善骨質(zhì)疏松大鼠股骨的最大載荷的生物力學(xué)性能，P＜0.05。
　　(二)骨痂測(cè)量結(jié)果:(1)骨折內(nèi)固定術(shù)后2周時(shí):骨碎補(bǔ)總酮組骨痂較對(duì)照組小P=0.007;與阿侖膦酸鈉組對(duì)比骨痂也較小P=0.004;與聯(lián)合用藥組相比骨痂也較小

10、P=0.027，說(shuō)明骨碎補(bǔ)總酮的骨痂較其他組來(lái)說(shuō)骨痂成熟較快，有促進(jìn)骨折愈合作用。(2)骨折內(nèi)固定術(shù)后4周時(shí):阿侖膦酸鈉組與對(duì)照組比較，P=0.036;與骨碎補(bǔ)總酮組比較，P＜0.001;與聯(lián)合用藥組比較P=0.011，可以認(rèn)為4周時(shí)阿侖膦酸鈉組形成的骨痂較其他組大，阿侖膦酸鈉的早期應(yīng)用可能影響骨折的愈合，延長(zhǎng)骨折的成熟，而骨碎補(bǔ)總酮組與對(duì)照組比較，P=0.005;與阿侖膦酸鈉組比較，P＜0.001;與聯(lián)合用藥組比較，P=0.015，可

11、以認(rèn)為4周時(shí)骨碎補(bǔ)總酮組所形成的骨痂較其他組小進(jìn)一步顯示了骨碎補(bǔ)總酮有促進(jìn)骨痂成熟，促進(jìn)骨折愈合的作用。(3)骨折內(nèi)固定術(shù)后6周:各組之間差異均無(wú)顯著性意義，P＞0.05。
　?。ㄈ線讀片結(jié)果:骨折內(nèi)固定術(shù)后2周時(shí)，骨折線均比較明顯，少許骨痂形成，但不明顯，與對(duì)照組相比各實(shí)驗(yàn)組骨折端出現(xiàn)半透明帶。骨折內(nèi)固定術(shù)后4周時(shí)x線顯示在阿侖膦酸鈉組，骨碎補(bǔ)總酮組及聯(lián)合用藥組中內(nèi)外骨痂生長(zhǎng)，骨折線開始變得模糊，骨折內(nèi)固定術(shù)后6周時(shí)骨折線完

12、全消失，然而骨折內(nèi)固定術(shù)后4周時(shí)對(duì)照組骨折線仍然明顯，但已經(jīng)開始出現(xiàn)半透明帶，6周時(shí)骨折線仍然未完全消失。
　?。ㄋ模┙M織學(xué)檢查結(jié)果:對(duì)照組和阿侖膦酸鈉組各期原始小梁狀骨表面及骨陷窩內(nèi)破骨細(xì)胞數(shù)明顯較其他組少。骨碎補(bǔ)總酮組和聯(lián)合用藥組各期原始小梁狀骨表面成骨細(xì)胞及骨陷窩內(nèi)破骨細(xì)胞數(shù)明顯較其他組多;軟骨性骨痂取代纖維骨加快，同時(shí)軟骨骨痂向骨性骨痂轉(zhuǎn)化也較快。
　?。ㄎ澹┲兴幇筒几嘌兄平Y(jié)果:經(jīng)過(guò)調(diào)制基質(zhì)加入促透劑，以每克膏藥含9

13、mg骨碎補(bǔ)總酮和每克膏藥含27mg骨碎補(bǔ)總酮制得低劑量骨碎補(bǔ)總酮巴布膏和高劑量骨碎補(bǔ)總酮巴布膏2種劑型。
　　結(jié)論:
　　阿侖膦酸鈉和骨碎補(bǔ)總酮二者均能有效增加維甲酸所致的骨質(zhì)疏松性SD大鼠的股骨的生物力學(xué)性能，包括骨的最大載荷，骨的壓縮剛度以及骨的彈性比率。骨碎補(bǔ)總酮能構(gòu)促進(jìn)維甲酸所致的骨質(zhì)疏松性SD大鼠股骨骨折的骨愈合，加快骨痂的成熟。阿侖膦酸鈉和骨碎補(bǔ)總酮的聯(lián)合治療對(duì)維甲酸所致的骨質(zhì)疏松性SD大鼠的骨折愈合和骨痂形成有

14、一種附加的效果。骨碎補(bǔ)總酮中藥巴布膏的初步研制是可行的，給骨碎補(bǔ)總酮外用提供一種新的劑型。
　　意義:
　　通過(guò)試驗(yàn)我們進(jìn)一步證實(shí)骨碎補(bǔ)總酮有利于促進(jìn)骨質(zhì)疏松性骨折的骨愈合，提高的骨生物力學(xué)強(qiáng)度，與阿侖膦酸鈉的合用有疊加效果。接著我們要研制成功了國(guó)內(nèi)第一帖骨碎補(bǔ)總酮巴布膏制劑意義重大。
　　我國(guó)古代早已有“透皮給藥技術(shù)”即俗稱“狗皮膏藥”二者原理是一樣的，“狗皮膏藥”所存在的缺點(diǎn)是，貼劑達(dá)不到當(dāng)今世界經(jīng)皮給藥技術(shù)的要求

15、:透皮性、粘貼性差、反復(fù)粘貼次數(shù)少、不親水、尤其嚴(yán)重的是透皮給藥的藥物利用率低并且對(duì)人體皮膚過(guò)敏。而新型、天然及合成高分子巴布劑基質(zhì)平臺(tái)，避免了這些缺點(diǎn)，從而將成為未來(lái)醫(yī)藥界貼劑制作廣泛使用的載體。
　　從西藥巴布膏如氟比洛芬巴布膏近幾年在市場(chǎng)上的巨大成功來(lái)看，據(jù)有關(guān)機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè)，在未來(lái)的20～30年內(nèi)，大約有30％以上的藥物將改成經(jīng)皮給藥制劑，勢(shì)必掀起一個(gè)內(nèi)病外治的新高潮。而我國(guó)擁有豐富且療效確切的中藥貼敷劑資源和悠久的中醫(yī)外治法歷