二硫化鉬介導(dǎo)的Plk1基因沉默對(duì)肝癌細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:探討聚乙二醇修飾的二硫化鉬作為基因載體的可行性及介導(dǎo)Plk1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的影響。
　　方法:
　　1)采用化學(xué)剝離法合成了二硫化鉬（MoS2）納米片，再用高分子聚合物聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)、聚乙烯亞胺(polyethylenimine, PEI)層層修飾為MoS2-PEG-PEI，并對(duì)合成的二硫化鉬材料進(jìn)行表征研究。
　　2)通過體外細(xì)胞毒性試驗(yàn)對(duì)二硫化鉬納米材料進(jìn)行體外毒

2、性實(shí)驗(yàn)。
　　3)用凝膠阻滯電泳實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)二硫化鉬納米材料和小干擾RNA（small interfering RNA，siRNA）的結(jié)合能力。
　　4)以MoS2-PEG-PEI材料作為siPlk1的載體，對(duì)人肝癌細(xì)胞株（HepG2細(xì)胞）進(jìn)行轉(zhuǎn)染，通過共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞攝取 MoS2-PEG-PEI/siRNA復(fù)合物情況。
　　5)通過 Western blotting以及RT-qPCR實(shí)驗(yàn)研究MoS2-PEG-PEI

3、介導(dǎo)的siPlk1轉(zhuǎn)染對(duì)肝癌細(xì)胞蛋白及mRNA表達(dá)水平的影響，并通過流式細(xì)胞技術(shù)觀察肝癌細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1)單層二硫化鉬納米片進(jìn)行了LA-PEG修飾和加聚PEI支鏈后，所得到的MoS2-PEG-PEI，具有較好的穩(wěn)定性，并帶有正電荷； MoS2、MoS2-PEG的Zeta電位分別為?17.9 and-8.9 mV。MoS2-PEG聚合帶正電荷的PEI涂層后Zeta電位增加為19.9 mV，帶有更多正電荷

4、r>　　2)MoS2, MoS2-PEG和 MoS2-PEG-PEI均無明顯細(xì)胞毒性。
　　3)當(dāng)N/P比在5以上時(shí)，凝膠電泳結(jié)果顯示MoS2-PEG-PEI明顯阻滯siRNA。
　　4)共聚焦顯微鏡顯示MoS2-PEG-PEI/siRNA成功轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞。
　　5）Western blotting以及RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明，MoS2-PEG-PEI/siRNA沉默HepG2細(xì)胞相關(guān)蛋白表達(dá)。
　　6