桉葉油對胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表達的影響.pdf

1、目的：利用桉葉油灌胃SD孕鼠，通過檢測胎鼠腦組織中Wnt信號通路的信號分子Wnt3a、β-catenin蛋白及其mRNA的表達，研究桉葉油的生物學(xué)活性是否影響腦組織細胞Wnt3a、β-catenin蛋白及其mRNA的表達，為后期探索桉葉油拮抗維甲酸誘發(fā)神經(jīng)管畸形的作用機理是否與Wnt信號傳導(dǎo)通路有關(guān)提供部分實驗依據(jù)，同時為桉葉油新的生物活性在臨床上開發(fā)利用提供理論和實驗依據(jù)。
　　方法：通過觀察陰栓的方法，選出SD孕鼠60只，隨機

2、分為6組，每組10只，3個實驗組（桉葉油高、中、低劑量），溶劑花生油組，陽性對照組（維甲酸）和正常對照組（飲食自由）。3個實驗組分別用300mg/kg、200mg/kg、100mg/kg桉葉油于孕第7-16天灌胃，每天一次。溶劑組用花生油2ml/只于孕第7-16d灌胃，每天一次。陽性對照組用40mg/kg的維甲酸于孕第10天灌胃一次。正常對照組為自由飲食。各組孕鼠除用藥不同外，其余飼養(yǎng)條件均相同。各組于孕16天末次用藥2小時后處死孕鼠取

3、胚胎，記錄孕鼠體重，子宮重，胎盤重。記錄胚胎植入總數(shù)，吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)。觀察胚胎發(fā)育情況。每窩活胎中取兩只胎鼠腦組織左右各半分別置于1.5ml離心管中，-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。左大腦組織提取蛋白，Western Blot技術(shù)檢測其Wnt3a、β-catenin蛋白的表達，右大腦組織提取RNA，熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測其Wnt3a、β-cateninmRNA表達。其余胎鼠腦組織固定，免疫組化技術(shù)檢測其Wnt3a、β-cateni

4、n蛋白的表達，原位雜交技術(shù)檢測其Wnt3a、β-cateninmRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.桉葉油對孕鼠的影響
　　各組孕鼠未見明顯的異常表現(xiàn)，被毛、活動、飲食、大便均正常。各組孕鼠的體重變化、子宮重、活胎胎盤重均無顯著差異（P>0.05）。
　　2.桉葉油對大鼠胚胎植入的影響
　　正常胎鼠體型完好，皮膚紅潤，刺激運動反應(yīng)良好，外觀無畸形?；翁ナ篌w型較正常胎鼠小，膚色偏暗紅色，可見無尾畸形特征。各

5、組孕鼠植入胚胎總數(shù)均無明顯差異（P>0.05）；桉葉油各組、溶劑花生油組的活胎率與正常對照組比較無顯著性差異（P>0.05），但較陽性對照組的活胎率高（P<0.05）。桉葉油各組、溶劑花生油組的吸收胎率與正常對照組比較無顯著性差異（P>0.05），但較陽性對照組的吸收胎率低（P<0.05）。桉葉油各組、溶劑花生油組和正常對照組胚胎中未見畸形胎和死胎，但在陽性對照組中出現(xiàn)畸形胎和死胎，其畸胎率、死胎率與桉葉油各組、溶劑花生油組和正常對照組

6、比較有顯著差異（P<0.05）。提示在本實驗條件下桉葉油對大鼠胚胎植入無明顯胚胎毒性，維甲酸干擾了大鼠胚胎植入，有胚胎毒性。
　　3.桉葉油對胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表達的影響
　　與正常對照組比較，桉葉油各組、陽性對照組胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA的表達是增高的（P<0.05），而溶劑花生油組胎鼠腦組織Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA的表達是降低的（P<0