地塞米松對(duì)宮內(nèi)感染致胎鼠腦組織TNF-α、s-100表達(dá)及腦白質(zhì)損傷影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：⑴研究宮內(nèi)感染致胎鼠腦組織腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及S-100蛋白（S-100）表達(dá)的影響，探討TNF-α、S-100在宮內(nèi)感染致胎鼠腦白質(zhì)病變中的作用。⑵研究地塞米松（Dexamethasone，Dex）對(duì)宮內(nèi)感染致胎鼠腦組織TNF-α、S-100蛋白水平的影響，探討Dex對(duì)宮內(nèi)感染致胎鼠腦白質(zhì)病變的保護(hù)作用。
　　方法：①實(shí)驗(yàn)分組:40只清潔級(jí)健康成年SD大鼠（雄性10只，雌性30只，雌性體重:200～250g，雄

2、性體重:300～350g）置于室溫18℃～20℃，相對(duì)濕度40％～70％的動(dòng)物房?jī)?nèi)飼養(yǎng)，適應(yīng)環(huán)境一周后，于下午17:00將雌、雄大鼠按3∶1合籠飼養(yǎng)，次日上午06:00觀察，以觀察到陰栓之日定為受孕第一天，然后將孕鼠隨機(jī)分為以下三組:即對(duì)照組（生理鹽水組）、LPS組（宮內(nèi)感染組）、Dex干預(yù)組（地塞米松干預(yù)組），每組各10只孕鼠。②模型制作及藥物干預(yù):參照Bell等人的方法，通過(guò)給孕鼠腹腔內(nèi)注射脂多糖(LPS)造成孕鼠宮內(nèi)感染模型。LP

3、S組孕鼠在孕第17、18天連續(xù)2天腹腔注射LPS350μg/kg;Dex干預(yù)組孕鼠在孕第17、18天連續(xù)2天腹腔注射LPS350μg/kg，1小時(shí)后腹腔注射Dex0.5mg/kg;對(duì)照組在相同時(shí)間點(diǎn)給予等容積的生理鹽水。術(shù)后將各組孕鼠置于清潔飼養(yǎng)籠內(nèi)，常規(guī)飼養(yǎng)。③觀測(cè)指標(biāo):觀察各組孕鼠注藥后的一般情況，是否有流產(chǎn)、死產(chǎn)等現(xiàn)象，記錄新生鼠及胎鼠只數(shù)、測(cè)量胎鼠體重與腦重;各組均于第2天注藥后3小時(shí)、6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，取8

4、只胎鼠（至少來(lái)自2只不同的孕鼠），將胎鼠處死后取胎鼠腦組織，后將孕鼠處死，取胎盤和子宮，均做HE染色，光鏡下觀察胎鼠腦組織、胎盤和子宮病理形態(tài)學(xué)改變;應(yīng)用S-P免疫組化法分別檢測(cè)三組各時(shí)間點(diǎn)胎鼠腦組織TNF-α、S-100蛋白的動(dòng)態(tài)變化。
　　結(jié)果：⑴孕鼠一般情況及分娩情況:三組孕鼠注藥后均進(jìn)食、活動(dòng)正常，無(wú)孕鼠死亡。對(duì)照組孕鼠無(wú)死產(chǎn)、死胎及流產(chǎn)，共獲胎鼠99只;LPS組死產(chǎn)數(shù)為2只，死胎數(shù)為7只，無(wú)流產(chǎn)，共獲新生鼠及胎鼠86只;

5、Dex干預(yù)組死胎數(shù)為1只，無(wú)死產(chǎn)及流產(chǎn)，共獲新生鼠及胎鼠91只。⑵各組胎鼠體重和腦重的變化:LPS組注藥后3h、6h、24h、48h胎鼠體重及腦重與對(duì)照組比較均明顯降低(P＜0.05);Dex干預(yù)組胎鼠體重及腦重在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與LPS組比較均明顯增加(P＜0.05)，與對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)比較均有所減少，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。⑶胎盤及子宮病理形態(tài)改變:LPS組注藥后孕鼠胎盤及子宮內(nèi)充血、水腫，并見大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);Dex干預(yù)組胎盤及

6、子宮內(nèi)充血、水腫，炎性浸潤(rùn)較LPS組減輕;對(duì)照組胎盤及子宮病理形態(tài)學(xué)上未觀察到明顯炎癥反應(yīng)。⑷胎鼠腦組織病理形態(tài)改變:LPS組胎鼠腦組織出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞水腫，胞質(zhì)淡染，核染色不清，白質(zhì)內(nèi)神經(jīng)纖維走向紊亂，粗細(xì)不均，結(jié)構(gòu)疏松呈篩網(wǎng)狀;Dex干預(yù)組相比LPS組胎鼠腦組織細(xì)胞水腫，出血，白質(zhì)損傷等改變均有不同程度的減輕;對(duì)照組胎鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)完整，布局有序，核淡，核仁清楚。⑸各組不同時(shí)間點(diǎn)胎鼠腦組織TNF-α和S-100蛋白的表達(dá):LP

7、S組注藥后3h、6h、24h、48h胎鼠腦組織TNF-α、S-100蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.01);Dex干預(yù)組注藥后3h、6h、24h、48h胎鼠腦組織TNF-α、S-100蛋白表達(dá)水平與LPS組比較顯著減低(P＜0.01)，而與對(duì)照組相比明顯升高(P＜0.01)。⑹TNF-α與S-100蛋白相關(guān)性分析:對(duì)腦組織中宮內(nèi)感染及Dex干預(yù)后TNF-α與S-100進(jìn)行相關(guān)性分析:宮內(nèi)感染后測(cè)得r=0.547，P＜0.01;

8、 Dex干預(yù)后r=0.843，P＜0.01;TNF-α與S-100蛋白之間存在明顯正相關(guān)性。
　　結(jié)論：①孕17、18天大鼠腹腔內(nèi)注射LPS建立的宮內(nèi)感染大鼠模型導(dǎo)致胎鼠體重、腦重降低，胎鼠腦組織神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量減少、水腫，白質(zhì)內(nèi)神經(jīng)纖維紊亂，粗細(xì)不均，并有局灶性出血，提示宮內(nèi)感染可導(dǎo)致胎鼠腦組織損傷，發(fā)生腦白質(zhì)病變。②宮內(nèi)感染后，胎鼠腦組織內(nèi)細(xì)胞因子TNF-α、S-100蛋白的表達(dá)增加，提示由宮內(nèi)感染導(dǎo)致的細(xì)胞因子反應(yīng)在腦白質(zhì)損傷的