組織激肽釋放酶8在宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷仔鼠海馬及血清中的表達.pdf

1、目的：
　　本實驗通過孕鼠腹腔注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）構(gòu)建宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷仔鼠模型，觀察組織激肽釋放酶8（Kallikrein8,Neuropsin，KLK8）在仔鼠海馬及血清中的表達變化，以探討宮內(nèi)感染仔鼠發(fā)生腦白質(zhì)損傷的機制。
　　方法：
　　選取健康三月齡SD大鼠（Sprague-Dawley大鼠）52只，按照雌雄1：1的比例交配。受孕成功的孕鼠隨機分為正常對照組（對照組）和宮

2、內(nèi)感染組（感染組）；孕18天時，感染組孕鼠連續(xù)2天腹腔注射LPS，建立宮內(nèi)感染致腦白質(zhì)損傷仔鼠模型；對照組孕鼠注射同等劑量的生理鹽水。兩組孕鼠均正常飲食喂養(yǎng)及自由飲水，仔鼠生后由母鼠哺乳喂養(yǎng)，選擇生后1日齡、3日齡、7日齡和14日齡4個時間點，每個時間點每組有9只仔鼠，測量仔鼠出生體重及各個時間點時的體重、腦重，在各個時間點9只仔鼠中隨機選取3只仔鼠取腦組織進行HE染色觀察腦組織形態(tài)，其余6只留取海馬組織，兩側(cè)分別用Western bl

3、ot及RT-PCR檢測海馬組織中組織激肽釋放酶8的動態(tài)表達，同時檢測血清中組織激肽釋放酶8的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1、兩組大鼠體重及腦重的動態(tài)比較：感染組出生時及1日齡時體重降低（P＜0.05），到3日齡、7日齡、14日齡時體重與對照組無明顯差異（P＞0.05）；感染組1日齡仔鼠腦重降低（P＜0.01），到3日齡、7日齡、14日齡時腦重與對照組無明顯差異（P＞0.05）。
　　2、兩組大鼠腦組織HE染色的變化：感

4、染組SD大鼠生后1天、3天腦組織切片可見組織疏松、水腫；生后7天及14天腦白質(zhì)染色淡，結(jié)構(gòu)疏松呈篩網(wǎng)狀，細胞數(shù)減少。同時感染組還有腦室內(nèi)出血、腦白質(zhì)血管擴張、毛細血管破裂出血等現(xiàn)象。對照組仔鼠腦組織切片見腦室周圍白質(zhì)區(qū)域無明顯水腫，無明顯細胞減少。
　　3、兩組大鼠海馬組織中組織激肽釋放酶8的動態(tài)表達：在四個時間點，1日齡時，兩組大鼠組織激肽釋放酶8的表達均低，3日齡時表達增加，7日齡和14日齡時明顯表達；Western blot

5、及RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)與對照組相比，在1日齡、3日齡及7日齡時感染組仔鼠組織激肽釋放酶8的表達均高于對照組（P＜0.05）。到14日齡時兩組表達無明顯差異（P＞0.05）。
　　4、血清組織激肽釋放酶8表達水平比較：四個時間點，在1日齡時表達最低，隨著日齡漸增加，到7日齡與14日齡時明顯表達；兩組比較，在1日齡、3日齡及7日齡時感染組仔鼠較對照組高（P＜0.05），到14日齡時兩組表達無明顯差異（P＞0.05）。
　　5、組

6、織激肽釋放酶8血清表達水平與Western blot半定量檢測海馬中蛋白量的相關性分析：海馬組織中KLK8表達的值與血清濃度值之間均呈正相關關系，直線等級相關系數(shù)為0.759(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、孕鼠腹腔注射LPS能建立宮內(nèi)感染大鼠腦白質(zhì)損傷模型。
　　2、孕鼠腹腔注射LPS建立的宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷仔鼠，出生時體重、腦重低，生后腦白質(zhì)染色淡，結(jié)構(gòu)疏松呈篩網(wǎng)狀，細胞數(shù)減少，并有腦室內(nèi)出血、腦白質(zhì)血管擴張