納米粒子負(fù)載的阿霉素對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞的靶向殺傷及生物學(xué)意義.pdf

1、乳腺癌是嚴(yán)重危害女性健康的一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。作為蒽環(huán)類抗生素，阿霉素（DOX)是應(yīng)用于乳腺癌化療藥物的代表之一。阿霉素屬于非周期類抑制類藥物，對(duì)處于不同細(xì)胞周期的腫瘤細(xì)胞均具有殺傷作用，但DOX缺乏對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性，會(huì)損傷正常細(xì)胞，產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，因此急需發(fā)展新型安全高效的乳腺癌治療方法。
　　納米材料具有低毒或無毒、生物可降解性、在體內(nèi)具有良好的生物相容性、以及對(duì)實(shí)體瘤的易穿透性和高滯留效應(yīng)，

2、從而成為目前的研宄熱點(diǎn)，并有望成為新型的載藥系統(tǒng)。更為重要的是納米粒子表面可進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)修飾，使其在負(fù)載藥物的同時(shí)能夠主動(dòng)靶向腫瘤。因此可借助納米載藥系統(tǒng)來提高和改善化療藥物對(duì)腫瘤的治療效果。
　　本課題利用已研制成功的負(fù)載DOX的還原敏感、可逆交聯(lián)的透明質(zhì)酸納米粒子（DOX-NPs)，研究其在體、內(nèi)外主動(dòng)靶向腫瘤細(xì)胞和對(duì)腫瘤細(xì)胞特異性殺傷的特性與效果。
　　第一部分負(fù)載DOX的納米粒子對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞株殺傷及機(jī)制<

3、br>　　目的：研究負(fù)載DOX的還原敏感、可逆交聯(lián)的透明質(zhì)酸納米粒子（DOX-NPs)體外對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的靶向性及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。
　　方法：通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MCF-7細(xì)胞表面CD44分子的表達(dá)；利用流式細(xì)胞術(shù)以及激光共聚焦顯微鏡地觀察游離DOX(Free DOX)、DOX-NPs被細(xì)胞攝取的情況；將 Free DOX、DOX-NPs與細(xì)胞共育4 h后，通過CCK-8試劑盒檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制情況，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)分析

4、細(xì)胞存活情況，通過劃痕實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞迀移，使用Hoechst試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡。設(shè)置DOX-NPs攝取抑制實(shí)驗(yàn)，以及用H A封閉MCF-7細(xì)胞表面CD44分子后，CCK-8試劑盒檢測(cè)DOX-NPs對(duì)細(xì)胞增殖的抑制情況。
　　結(jié)果：MCF-7細(xì)胞表面高表達(dá)CD44分子，DOX-NPs能夠被MCF-7細(xì)胞有效攝取。DOX-NPs對(duì)MCF-7的增殖、迀移具有顯著抑制作用，并明顯誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡。HA封閉細(xì)胞表面CD44分子后，D

5、OX-NPs被MCF-7細(xì)胞攝取受阻，且細(xì)胞增殖抑制能力下降。
　　結(jié)論：負(fù)載D O X的透明質(zhì)酸納米粒子DOX-NPs體外能被MCF-7細(xì)胞有效攝取，并對(duì)腫瘤細(xì)胞具有顯著的殺傷作用。
　　第二部分負(fù)載DOX的納米粒子對(duì)MCF-7荷瘤裸鼠的靶向殺傷及生物學(xué)意義
　　目的：研究負(fù)載DOX的還原敏感、可逆交聯(lián)的透明質(zhì)酸納米粒子（DOX-NPs)在體內(nèi)的分布和富積情況以及體內(nèi)治療乳腺癌的效果。
　　方法：血液循環(huán)實(shí)驗(yàn)研

6、宄DOX-NPs的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)；利用小動(dòng)物成像系統(tǒng)檢測(cè)納米粒子在腫瘤組織的富積情況，并測(cè)定DOX-NPs在荷瘤裸鼠體內(nèi)代謝10 h后腫瘤組織和各器官中DOX的含量；使用裸鼠乳腺癌模型，研究DOX-NPs體內(nèi)治療效果；并通過H&E染色和TUNEL方法檢測(cè)其對(duì)組織學(xué)結(jié)構(gòu)的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)DOX-NPs有效地延長循環(huán)時(shí)間。
　?。?) DOX-NPs能夠主動(dòng)富積到腫瘤部位，并減少在重要臟器的分布。