山核桃神經(jīng)營養(yǎng)功能因子的分離與鑒定.pdf

1、本研究利用神經(jīng)母瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)為體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，選取山核桃（Carya cathayensis Sarg.）為試驗(yàn)材料，從新鮮山核桃仁中分別提取脂溶性與水溶性成分處理SH-SY5Y細(xì)胞，測量細(xì)胞突觸長度及檢測神經(jīng)營養(yǎng)相關(guān)基因表達(dá)，探討山核桃神經(jīng)營養(yǎng)活性及其分子生物學(xué)機(jī)制。同時(shí)應(yīng)用HPLC及HPLC-MS檢測分析山核桃脂溶性與水溶性成分，分離鑒定山核桃神經(jīng)營養(yǎng)活性因子。主要結(jié)果如下:
　　(1)山核桃脂溶性成分與水溶性成分處

2、理SH-SY5Y細(xì)胞，細(xì)胞突觸長度與相關(guān)基因NF160、NPY、NGF表達(dá)檢測結(jié)果表明山核桃脂溶性成分與水溶性成分在一定濃度范圍內(nèi)能夠顯著促進(jìn)細(xì)胞突觸生長，由此說明山核桃脂溶性成分與水溶性成分都具神經(jīng)營養(yǎng)活性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)山核桃脂溶性成分能夠顯著誘導(dǎo)細(xì)胞NF160、NPY、NGF表達(dá)，山核桃水溶性成分能夠顯著誘導(dǎo)細(xì)胞NF160表達(dá)，說明山核桃通過調(diào)控NF160、NPY、NGF的表達(dá)調(diào)控神經(jīng)營養(yǎng)活性。
　　(2)山核桃脂溶性成分H

3、PLC及HPLC-MS檢測結(jié)果顯示山核桃脂溶性成分較對(duì)照具三個(gè)特異性色譜峰，分子量依次為278、280、282，通過分子量比對(duì)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品驗(yàn)證后確定三個(gè)特征峰依次為亞麻酸(LNA)、亞油酸(LA)、油酸(OA)。將三種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品按山核桃脂溶性成分對(duì)應(yīng)比例濃度混合后處理細(xì)胞，試驗(yàn)結(jié)果與山核桃脂溶性成分處理細(xì)胞結(jié)果相一致，由此確定山核桃脂溶性主要成分神經(jīng)營養(yǎng)活性因子為以上脂肪酸中的一種或幾種。
　　(3)以上三種脂肪酸按山核桃脂溶性

4、成分在自然狀態(tài)下對(duì)應(yīng)比例混合，不同濃度梯度處理細(xì)胞，結(jié)果顯示總濃度3.3μmol/L時(shí)活性最好，按此濃度進(jìn)行單一及改變脂肪酸比例分別處理細(xì)胞，結(jié)果表明三種脂肪酸比例為1∶8∶16（亞麻酸∶亞油酸∶油酸）神經(jīng)營養(yǎng)活性最好，混合后活性優(yōu)于單獨(dú)脂肪酸神經(jīng)營養(yǎng)活性。由此確定山核桃脂溶性主要成分神經(jīng)營養(yǎng)活性因子為按一定比例混合后的亞麻酸、亞油酸、油酸。
　　(4)山核桃水溶性成分HPLC、HPLC-MS檢測及標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)結(jié)果顯示其中含有胞苷、