睡眠剝奪對抑郁模型大鼠海馬區(qū)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的影響.pdf

1、背景和目的：
　　抑郁癥是一種具有反復發(fā)作和自殺傾向的常見精神障礙,快速抗抑郁效應機制的研究對抑郁癥治療意義重大。睡眠剝奪能夠發(fā)揮快速抗抑郁作用,且沒有明顯的副作用和禁忌癥,但其神經(jīng)生物學機制尚不明確。近來已經(jīng)有學者提出了“抑郁癥的神經(jīng)營養(yǎng)因子假說”,指出海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)等在抑郁癥的發(fā)生機制中具有重要的作用。本研究擬通過對慢性應激抑郁模型大鼠進行72h快眼動睡眠剝奪(REMS

2、D)和72h氯米帕明治療,觀察大鼠的行為學改變及海馬中BDNF和GDNF表達水平的變化,探討海馬區(qū)BDNF、GDNF在抑郁發(fā)生及睡眠剝奪快速抗抑郁效應機制中的可能作用。
　　材料和方法：
　　實驗動物為Sprague Dawley 2-3月齡成年健康雄性大鼠(由汕頭大學醫(yī)學院動物中心提供)。大鼠隨機分為正常對照組(n=6,以下稱正常對照組)和應激造模組(n=30)。應激造模組采用28d慢性輕度不可預見性應激(CMUS)結(jié)合孤

3、養(yǎng)方式建立抑郁模型,抑郁模型大鼠再隨機分為5組:抑郁模型組(n=6,以下稱抑郁模型組)、抑郁模型+72hREMSD組(n=6,以下稱快眼動睡眠剝奪(REMSD)組)、抑郁模型+水環(huán)境對照組(n=6,以下稱水環(huán)境對照組)、抑郁模型+72h氯米帕明治療組(n=6,以下稱氯米帕明組)、抑郁模型+72h生理鹽水對照組(n=6,以下稱生理鹽水(NS)對照組)。利用小平臺水環(huán)境法對REMSD組大鼠進行快眼動睡眠剝奪,并用大平臺水環(huán)境(水環(huán)境對照組)

4、做對照,排除水環(huán)境的影響。氯米帕明組、生理鹽水組大鼠分別在72h過程中的0h、24h、48h、72h時間點腹腔注射氯米帕明、生理鹽水。生理鹽水組作為氯米帕明組的對照組,排除腹腔注射的影響。在實驗過程中采用開場試驗、蔗糖水消耗實驗、強迫游泳實驗觀察大鼠的行為學改變,用Western-blot方法檢測各組大鼠海馬區(qū)BDNF、GDNF表達水平的變化。實驗結(jié)果用Excel 2003和SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標準差(x_

5、±s)表示,采用單因素方差分析(one-way ANOVA)、t檢驗(t-test)進行組間均數(shù)比較,P≤0.05為差別有統(tǒng)計學意義,P≤0.01為差別有高度統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1.開場試驗:經(jīng)過28dCMUS,與正常對照組相比,應激造模組大鼠總路程、中央路程、周邊路程均顯著減少(P<0.01);抑郁模型大鼠經(jīng)過72hREMSD后,REMSD組大鼠與水環(huán)境對照組相比總路程、中央路程、周邊路程顯著增加(P<0.01)

6、;抑郁模型大鼠經(jīng)過72h藥物注射治療后,氯米帕明組與NS組大鼠相比總路程、中央路程、周邊路程均無顯著性差異(P>0.05)。經(jīng)過72h治療后,REMSD組與氯米帕明組大鼠相比,總路程、中央路程、周邊路程均顯著增加(P<0.01)。
　　2.蔗糖水消耗實驗:經(jīng)過28dCMUS后,應激造模組大鼠蔗糖水消耗量和蔗糖水消耗百分比與正常對照組相比均顯著減少(P<0.01)。
　　3.強迫游泳實驗:經(jīng)過28dCMUS后,應激造模組大鼠的

7、不動時間與正常對照組相比顯著延長(P<0.01)。
　　4.大鼠海馬區(qū)BDNF和GDNF表達水平的變化:
　　28dCMUS后,抑郁模型組大鼠海馬區(qū)BDNF表達水平與正常對照組相比無顯著性差異(P>0.05,獨立樣本t檢驗);72h不同治療方法處理后,各組(除正常對照組)間大鼠海馬區(qū)BDNF表達水平差別有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01,one-wayANOVA)。REMSD組大鼠海馬區(qū)BDNF表達水平與水環(huán)境對照組相比明顯升高

8、(P<0.01),與抑郁模型組相比亦明顯升高(P<0.01);氯米帕明組大鼠海馬區(qū)BDNF表達水平與NS組相比無顯著性差異(P>0.05),與抑郁模型組相比亦無顯著性差異(P>0.05);REMSD組大鼠海馬區(qū)BDNF表達水平與氯米帕明組相比明顯升高(P<0.01)。
　　28dCMUS后,抑郁模型組大鼠海馬區(qū)GDNF表達水平與正常對照組相比明顯降低(P<0.01,獨立樣本t檢驗);72h不同治療方法處理后,各組(除正常對照組)間

9、大鼠海馬區(qū)GDNF表達水平無顯著性差異(P>0.05,one-wayANOVA)。REMSD組大鼠海馬區(qū)GDNF表達水平與水環(huán)境對照組、抑郁模型組相比無顯著性差異(P>0.05);氯米帕明組大鼠海馬區(qū)GDNF表達水平與NS組、抑郁模型組相比無顯著性差異(P>0.05);REMSD組大鼠海馬區(qū)GDNF表達水平與氯米帕明組相比也無顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1)經(jīng)過28dCMUS大鼠表現(xiàn)出抑郁樣狀態(tài),72hRE

10、MSD后大鼠的抑郁樣狀態(tài)得到快速改善,而72h氯米帕明治療卻對抑郁樣狀態(tài)無影響,提示睡眠剝奪具有快速逆轉(zhuǎn)慢性應激所致抑郁樣行為的作用。
　　2)28dCMUS后大鼠表現(xiàn)出抑郁樣行為,且抑郁模型組大鼠海馬區(qū)GDNF表達水平明顯降低,提示海馬區(qū)GDNF表達水平降低可能是慢性應激導致抑郁樣行為的機制之一。
　　3)72h快眼動睡眠剝奪能夠明顯升高抑郁模型大鼠海馬區(qū)BDNF的表達水平,72h氯米帕明治療對抑郁模型大鼠海馬區(qū)BDNF表