睡眠剝奪對(duì)抑郁模型大鼠海馬區(qū)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的影響.pdf

1、背景和目的：
　　抑郁癥是一種具有反復(fù)發(fā)作和自殺傾向的常見(jiàn)精神障礙,快速抗抑郁效應(yīng)機(jī)制的研究對(duì)抑郁癥治療意義重大。睡眠剝奪能夠發(fā)揮快速抗抑郁作用,且沒(méi)有明顯的副作用和禁忌癥,但其神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制尚不明確。近來(lái)已經(jīng)有學(xué)者提出了“抑郁癥的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子假說(shuō)”,指出海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF),膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)等在抑郁癥的發(fā)生機(jī)制中具有重要的作用。本研究擬通過(guò)對(duì)慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠進(jìn)行72h快眼動(dòng)睡眠剝奪(REMS

2、D)和72h氯米帕明治療,觀察大鼠的行為學(xué)改變及海馬中BDNF和GDNF表達(dá)水平的變化,探討海馬區(qū)BDNF、GDNF在抑郁發(fā)生及睡眠剝奪快速抗抑郁效應(yīng)機(jī)制中的可能作用。
　　材料和方法：
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為Sprague Dawley 2-3月齡成年健康雄性大鼠(由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供)。大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=6,以下稱正常對(duì)照組)和應(yīng)激造模組(n=30)。應(yīng)激造模組采用28d慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激(CMUS)結(jié)合孤

3、養(yǎng)方式建立抑郁模型,抑郁模型大鼠再隨機(jī)分為5組:抑郁模型組(n=6,以下稱抑郁模型組)、抑郁模型+72hREMSD組(n=6,以下稱快眼動(dòng)睡眠剝奪(REMSD)組)、抑郁模型+水環(huán)境對(duì)照組(n=6,以下稱水環(huán)境對(duì)照組)、抑郁模型+72h氯米帕明治療組(n=6,以下稱氯米帕明組)、抑郁模型+72h生理鹽水對(duì)照組(n=6,以下稱生理鹽水(NS)對(duì)照組)。利用小平臺(tái)水環(huán)境法對(duì)REMSD組大鼠進(jìn)行快眼動(dòng)睡眠剝奪,并用大平臺(tái)水環(huán)境(水環(huán)境對(duì)照組)

4、做對(duì)照,排除水環(huán)境的影響。氯米帕明組、生理鹽水組大鼠分別在72h過(guò)程中的0h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)腹腔注射氯米帕明、生理鹽水。生理鹽水組作為氯米帕明組的對(duì)照組,排除腹腔注射的影響。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中采用開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn)、蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察大鼠的行為學(xué)改變,用Western-blot方法檢測(cè)各組大鼠海馬區(qū)BDNF、GDNF表達(dá)水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Excel 2003和SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x_

5、±s)表示,采用單因素方差分析(one-way ANOVA)、t檢驗(yàn)(t-test)進(jìn)行組間均數(shù)比較,P≤0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P≤0.01為差別有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.開(kāi)場(chǎng)試驗(yàn):經(jīng)過(guò)28dCMUS,與正常對(duì)照組相比,應(yīng)激造模組大鼠總路程、中央路程、周邊路程均顯著減少(P<0.01);抑郁模型大鼠經(jīng)過(guò)72hREMSD后,REMSD組大鼠與水環(huán)境對(duì)照組相比總路程、中央路程、周邊路程顯著增加(P<0.01)

6、;抑郁模型大鼠經(jīng)過(guò)72h藥物注射治療后,氯米帕明組與NS組大鼠相比總路程、中央路程、周邊路程均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。經(jīng)過(guò)72h治療后,REMSD組與氯米帕明組大鼠相比,總路程、中央路程、周邊路程均顯著增加(P<0.01)。
　　2.蔗糖水消耗實(shí)驗(yàn):經(jīng)過(guò)28dCMUS后,應(yīng)激造模組大鼠蔗糖水消耗量和蔗糖水消耗百分比與正常對(duì)照組相比均顯著減少(P<0.01)。
　　3.強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn):經(jīng)過(guò)28dCMUS后,應(yīng)激造模組大鼠的

7、不動(dòng)時(shí)間與正常對(duì)照組相比顯著延長(zhǎng)(P<0.01)。
　　4.大鼠海馬區(qū)BDNF和GDNF表達(dá)水平的變化:
　　28dCMUS后,抑郁模型組大鼠海馬區(qū)BDNF表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05,獨(dú)立樣本t檢驗(yàn));72h不同治療方法處理后,各組(除正常對(duì)照組)間大鼠海馬區(qū)BDNF表達(dá)水平差別有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,one-wayANOVA)。REMSD組大鼠海馬區(qū)BDNF表達(dá)水平與水環(huán)境對(duì)照組相比明顯升高

8、(P<0.01),與抑郁模型組相比亦明顯升高(P<0.01);氯米帕明組大鼠海馬區(qū)BDNF表達(dá)水平與NS組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05),與抑郁模型組相比亦無(wú)顯著性差異(P>0.05);REMSD組大鼠海馬區(qū)BDNF表達(dá)水平與氯米帕明組相比明顯升高(P<0.01)。
　　28dCMUS后,抑郁模型組大鼠海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平與正常對(duì)照組相比明顯降低(P<0.01,獨(dú)立樣本t檢驗(yàn));72h不同治療方法處理后,各組(除正常對(duì)照組)間

9、大鼠海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(P>0.05,one-wayANOVA)。REMSD組大鼠海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平與水環(huán)境對(duì)照組、抑郁模型組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05);氯米帕明組大鼠海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平與NS組、抑郁模型組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05);REMSD組大鼠海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平與氯米帕明組相比也無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1)經(jīng)過(guò)28dCMUS大鼠表現(xiàn)出抑郁樣狀態(tài),72hRE

10、MSD后大鼠的抑郁樣狀態(tài)得到快速改善,而72h氯米帕明治療卻對(duì)抑郁樣狀態(tài)無(wú)影響,提示睡眠剝奪具有快速逆轉(zhuǎn)慢性應(yīng)激所致抑郁樣行為的作用。
　　2)28dCMUS后大鼠表現(xiàn)出抑郁樣行為,且抑郁模型組大鼠海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平明顯降低,提示海馬區(qū)GDNF表達(dá)水平降低可能是慢性應(yīng)激導(dǎo)致抑郁樣行為的機(jī)制之一。
　　3)72h快眼動(dòng)睡眠剝奪能夠明顯升高抑郁模型大鼠海馬區(qū)BDNF的表達(dá)水平,72h氯米帕明治療對(duì)抑郁模型大鼠海馬區(qū)BDNF表