腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子對糖尿病大鼠早期神經(jīng)視網(wǎng)膜病變的影響.pdf

1、本文擬在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平探討在糖尿病早期，Wistar大鼠視網(wǎng)膜中BDNF水平的變化，并且在糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)注射BDNF之前與注射之后、在糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)注射腺病毒介導(dǎo)的BDNF之前與注射之后，Wistar大鼠視網(wǎng)膜中TH的水平及多巴胺能無長突細(xì)胞數(shù)目的變化，旨在初步探討在糖尿病的早期視網(wǎng)膜神經(jīng)病變的發(fā)病機制。為臨床上治療糖尿病視網(wǎng)膜病變及BDNF的眼內(nèi)應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 研究方法： 1．選用9周齡Wis

2、tar大鼠，體重180～220g之間，以鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射，制成糖尿病模型，于糖尿病模型建立的4周后處死大鼠，取出眼球，取視網(wǎng)膜切片進行BDNF原位雜交檢測，觀察糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜中BDNFmRNA水平的變化。取視網(wǎng)膜組織勻漿，夾心法EIdSA檢測大鼠視網(wǎng)膜中BDNF的蛋白質(zhì)水平。 2．于大鼠糖尿病模型建立的2周后，向大鼠眼玻璃體腔內(nèi)注射BDNF溶液，每3天注射一次，共注射5次。于模型建

3、立的4周后，處死大鼠，取出眼球，取視網(wǎng)膜組織進行Western blotting及視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色檢測，觀察大鼠視網(wǎng)膜中TH水平的變化，從而反映糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中多巴胺能無長突細(xì)胞水平的變化。 3．于大鼠糖尿病模型建立的2周后，向大鼠眼玻璃體腔內(nèi)注射含有BDNF基因的五型重組腺病毒(Ad．BDNF)，于模型建立的4周后，處死大鼠，取出眼球，取視網(wǎng)膜組織進行Western blotting及視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色檢測

4、，觀察大鼠視網(wǎng)膜中TH水平的變化，從而反映糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中多巴胺能無長突細(xì)胞水平的變化。 研究結(jié)果： 1．大鼠視網(wǎng)膜組織切片的原位雜交結(jié)果可見，實驗組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中BDNF陽性細(xì)胞計數(shù)降低，與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異；實驗組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中BDNF陽性細(xì)胞的染色灰度值亦降低，與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。Wistar大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿ELISA測定結(jié)果可見，實驗組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中BDNF蛋白質(zhì)水平降低，與對照組相比較

5、有統(tǒng)計學(xué)差異。 2．大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿Westem blotting測定結(jié)果可見，在實驗組中，糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)未注射BDNF眼大鼠視網(wǎng)膜中TH蛋白水平降低，與對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異。大鼠視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見，多巴胺能無長突細(xì)胞計數(shù)及灰度值亦降低，與對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異。實驗組糖尿病大鼠注射BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平、多巴胺能無長突細(xì)胞計數(shù)及灰度值與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。 3．大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿W

6、estern blotting測定結(jié)果可見，在實驗組中，糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)未注射Ad．BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平降低，與對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異。大鼠視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見，多巴胺能無長突細(xì)胞計數(shù)及灰度值亦降低，與對照組相比，有統(tǒng)計學(xué)差異。實驗組糖尿病大鼠注射Ad．BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平、多巴胺能無長突細(xì)胞計數(shù)及灰度值與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異。 研究結(jié)論： 1．在糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜中BDNF蛋白水