

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1、本文擬在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平探討在糖尿病早期,Wistar大鼠視網(wǎng)膜中BDNF水平的變化,并且在糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)注射BDNF之前與注射之后、在糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)注射腺病毒介導(dǎo)的BDNF之前與注射之后,Wistar大鼠視網(wǎng)膜中TH的水平及多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞數(shù)目的變化,旨在初步探討在糖尿病的早期視網(wǎng)膜神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制。為臨床上治療糖尿病視網(wǎng)膜病變及BDNF的眼內(nèi)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法: 1.選用9周齡Wis
2、tar大鼠,體重180~220g之間,以鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射,制成糖尿病模型,于糖尿病模型建立的4周后處死大鼠,取出眼球,取視網(wǎng)膜切片進(jìn)行BDNF原位雜交檢測(cè),觀察糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜中BDNFmRNA水平的變化。取視網(wǎng)膜組織勻漿,夾心法EIdSA檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜中BDNF的蛋白質(zhì)水平。 2.于大鼠糖尿病模型建立的2周后,向大鼠眼玻璃體腔內(nèi)注射BDNF溶液,每3天注射一次,共注射5次。于模型建
3、立的4周后,處死大鼠,取出眼球,取視網(wǎng)膜組織進(jìn)行Western blotting及視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色檢測(cè),觀察大鼠視網(wǎng)膜中TH水平的變化,從而反映糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞水平的變化。 3.于大鼠糖尿病模型建立的2周后,向大鼠眼玻璃體腔內(nèi)注射含有BDNF基因的五型重組腺病毒(Ad.BDNF),于模型建立的4周后,處死大鼠,取出眼球,取視網(wǎng)膜組織進(jìn)行Western blotting及視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)
4、,觀察大鼠視網(wǎng)膜中TH水平的變化,從而反映糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞水平的變化。 研究結(jié)果: 1.大鼠視網(wǎng)膜組織切片的原位雜交結(jié)果可見,實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中BDNF陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)降低,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中BDNF陽(yáng)性細(xì)胞的染色灰度值亦降低,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Wistar大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿ELISA測(cè)定結(jié)果可見,實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中BDNF蛋白質(zhì)水平降低,與對(duì)照組相比較
5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿Westem blotting測(cè)定結(jié)果可見,在實(shí)驗(yàn)組中,糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)未注射BDNF眼大鼠視網(wǎng)膜中TH蛋白水平降低,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大鼠視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見,多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞計(jì)數(shù)及灰度值亦降低,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠注射BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平、多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞計(jì)數(shù)及灰度值與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 3.大鼠視網(wǎng)膜組織勻漿W
6、estern blotting測(cè)定結(jié)果可見,在實(shí)驗(yàn)組中,糖尿病大鼠玻璃體腔內(nèi)未注射Ad.BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平降低,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。大鼠視網(wǎng)膜鋪片免疫組織化學(xué)染色結(jié)果可見,多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞計(jì)數(shù)及灰度值亦降低,與對(duì)照組相比,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)組糖尿病大鼠注射Ad.BDNF眼視網(wǎng)膜中TH蛋白水平、多巴胺能無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞計(jì)數(shù)及灰度值與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 研究結(jié)論: 1.在糖尿病早期大鼠視網(wǎng)膜中BDNF蛋白水
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