Netrin-1對(duì)早期糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠視網(wǎng)膜血管通透性的影響.pdf

1、目的:觀察外源性netrin-1對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠視網(wǎng)膜血管通透性的影響并分析可能的作用機(jī)制。
　　方法:健康清潔級(jí)雄性SD大鼠100只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組10只，正常+BSS空白對(duì)照組10只，糖尿病(DM)組80只。其中，DM組大鼠腹腔注射鏈脲左菌素(STZ)60mg/kg誘導(dǎo)。常規(guī)飼養(yǎng)3個(gè)月，每月隨機(jī)處死DM大鼠3只，行雙眼視網(wǎng)膜HE染色，當(dāng)確定大鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)時(shí)將剩余DM大鼠玻璃體腔注射5μl不同濃

2、度netrin-1，并根據(jù)濃度不同分為DR+netrin-1低劑量組(10μg/ml)，DR+netrin-1中劑量組(50μg/ml)，DR+netrin-1高劑量組(100μg/ml)及DR+BSS對(duì)照組，注藥1月后處死全部大鼠。伊文思藍(lán)檢測(cè)各組大鼠血-視網(wǎng)膜屏障，評(píng)估視網(wǎng)膜血管通透性變化;免疫組化方法觀察視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記物GFAP的表達(dá)情況;熒光定量RT-PCR分析各組視網(wǎng)膜緊密連接蛋白o(hù)ccludin mRNA的表達(dá)。<

3、br>　　結(jié)果:正常對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜GFAP免疫組化見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及神經(jīng)纖維層少量棕黃色顆粒，色淡;而在DR空白對(duì)照組中原有的視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層棕黃色顆粒顏色加深，染色范圍擴(kuò)大;玻璃體腔注射netrin-1，GFAP陽(yáng)性染色顆粒范圍變小進(jìn)一步減小，顏色變淡。對(duì)GFAP行半定量分析發(fā)現(xiàn):DR+netrin-1注射組較DR空白對(duì)照組GFAP表達(dá)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且netrin-1濃度越高，GFAP陽(yáng)性表達(dá)越

4、低，兩者呈明顯相關(guān)性(P＜0.05)。netrin-1低劑量組與DR空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。netrin-1高劑量組與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。對(duì)視網(wǎng)膜血管通透性檢測(cè)顯示:DR空白對(duì)照組較正常大鼠血管通透性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，外源性netrin-1可降低視網(wǎng)膜血管的滲透性，但不能使其恢復(fù)正常，并且該作用與netrin-1濃度有關(guān)(P＜0.05)。熒光定量RT-PCR顯示

5、:與正?？瞻讓?duì)照組比較，DR空白對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜occludin mRNA的表達(dá)量減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，外源性給予netrin-1后，occludin mRNA的表達(dá)升高，與同病程DR空白對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，雖然occludinmRNA表達(dá)增多，但仍不能恢復(fù)至正常水平(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠腹腔注射鏈脲左菌素3個(gè)月時(shí)可誘導(dǎo)出糖尿病視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型。
　　

6、2.糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性增高，緊密連接蛋白o(hù)ccludin與血管通透性密切相關(guān);
　　3.糖尿病視網(wǎng)膜病變時(shí)膠質(zhì)細(xì)胞活化增多，其活化狀態(tài)可影響occludin蛋白的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控血管通透性;
　　4.外源性netrin-1對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障具有保護(hù)作用，并且該作用與其濃度有關(guān)，濃度越高對(duì)視網(wǎng)膜血管的保護(hù)作用越顯著，但不能逆轉(zhuǎn)糖尿病視網(wǎng)膜病變進(jìn)程;
　　5.Netrin-1可能是通過抑制膠質(zhì)細(xì)胞活化來調(diào)