山核桃青衣多糖的提取分離、結(jié)構(gòu)和活性研究.pdf

1、浙江山核桃(Carya cathayensis Sarg.)乃浙江省重要經(jīng)濟(jì)植物,營養(yǎng)美味深受消費(fèi)者喜愛；而山核桃果實(shí)外青衣通常被當(dāng)作廢物丟棄,既污染環(huán)境,又浪費(fèi)了有用的資源,應(yīng)對其進(jìn)行研究開發(fā),并加以利用?，F(xiàn)有的糖生物學(xué)研究成果表明,植物多糖具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化等多種功效,且毒副作用較小,受到廣大專家學(xué)者的關(guān)注。因此,開發(fā)利用山核桃青衣多糖具有理論和實(shí)際意義。 本文以山核桃青衣為原料進(jìn)行了山核桃青衣多糖的提取、分離研究

2、,并分析了從山核桃青衣多糖粗品中純化所得的單一糖組分的結(jié)構(gòu)和活性。 通過正交試驗(yàn)對山核桃青衣多糖的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化,最佳提取條件為：料液比1:15,浸提溫度70℃,浸提時間150min。經(jīng)苯酚.硫酸法測定最佳提取條件下的多糖得率為0.927％,該條件下所得多糖粗品命名為PSW。 在分離純化研究中,比較了三氯乙酸法和Sevag法等脫蛋白工藝的優(yōu)劣,綜合考慮試劑消耗、多糖結(jié)構(gòu)和活性的保存等因素,選擇Sevag試劑反復(fù)脫蛋白

3、7次的工藝流程。并進(jìn)一步研究了脫色、透析、Sepharose 4B凝膠柱層析和DEAE sepharose FF離子交換柱層析等純化手段在分離純化PSW中的應(yīng)用,最終確定將PSW溶液用10％的活性炭在60℃下脫色2h,過濾去除活性炭,并用14000分子量的透析袋對水透析,最后用DEAE sepharose FF離子交換柱(2.0×20cm)和Sepharose 4B凝膠柱(2.0×40cm),進(jìn)一步純化,精制得到的糖組分命名為PSW-1

4、。經(jīng)高效凝膠色譜和醋酸纖維電泳分析確定PSW-1為單-組分,純度達(dá)95％以上。 采用紅外光譜分析PSW-1的官能團(tuán)特征,結(jié)果表明PSW-1有羧基的特征吸收峰,說明其為含糖醛酸的酸性多糖；硫酸咔唑法測得其糖醛酸含量為61.9％,硫酸咔唑法和地衣酚法分析其C/O比值接近1,據(jù)此判斷PSW-1是含有葡萄糖醛酸的雜多糖。氣相色譜分析結(jié)果顯示PSW-1是含有鼠李糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖四種中性單糖的雜多糖,各中性單糖的摩爾百分比為：12

5、.6％:20.1％:23.0％:44.4％。高效凝膠色譜(HP GPC)法測得PSW-1的分子量為133 021D。已有的多糖研究經(jīng)驗(yàn)表明,酸性雜多糖一般都具有較強(qiáng)的生物活性,且活性最強(qiáng)的多糖的相對分子量都集中于100 000～200 000 D之間。因此,根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以推測PSW-1是一種高活性的多糖化合物。 抗氧化實(shí)驗(yàn)表明,PSW-1具有一定的抗氧化能力,當(dāng)樣品濃度達(dá)到1mg·mL-1時,對DPPH·清除率達(dá)54.4％

6、,作為一種植物來源的抗氧化物質(zhì),它可能具有性質(zhì)溫和,毒副作用較小的特點(diǎn),有一定的利用價值。 體外免疫實(shí)驗(yàn)中,PSW在100.00μg·mL-1的濃度下顯示出免疫增強(qiáng)作用；而PSW-1在10.00pg·mL-1和100.00μg·mL-1濃度下均具有免疫增強(qiáng)作用,說明經(jīng)純化了的PSW-1的免疫調(diào)節(jié)作用優(yōu)于PSW;而在ConA和LPS的誘導(dǎo)作用下,0.01,0.10,1.00,10.00和100.00μg·mL-1的PSW和PSW-