睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)視神經(jīng)損傷保護(hù)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:(1)研究睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及其受體在視神經(jīng)損傷后不同時(shí)間視網(wǎng)膜中的表達(dá)及細(xì)胞定位;(2)了解玻璃體內(nèi)、眼球后及皮下注射時(shí),重組人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在SD大鼠重要器官及眼內(nèi)的分布情況,確定最佳及最易接受的眼部給藥方式;(3)探討眼球后注射外源性CNTF是否對(duì)實(shí)驗(yàn)性的視神經(jīng)損傷有保護(hù)作用;(4)探討CNTF對(duì)原供培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及晶體上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;(5)了解CNTF在眼局部應(yīng)用的眼部及全身毒副作用.方法:(1)

2、采用鉗夾視神經(jīng)的方法建立神經(jīng)損傷的模型,在損傷后1天、7天、14天、28天獲取視網(wǎng)膜,用RT-PCR測(cè)定視網(wǎng)膜中CNTFmRNA及其受體CNTFRα mRNA的表達(dá),用West Blotting方法了解CNTF及其受體蛋白水平的表達(dá),用免疫熒光的方法了解CNTF在視網(wǎng)膜各層中的表達(dá)和分布情況.(2)采用Iodogen法對(duì)rhCNTF進(jìn)行放射性<'125>I標(biāo)記,SD在鼠分為皮下注射組、眼球后注射組及玻璃體內(nèi)注射,分別于注射后30分、1小

3、時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、24小時(shí)檢測(cè)視網(wǎng)膜、玻璃體、視神經(jīng)、腎、肝、腦、脾等組織單位質(zhì)量放射性攝取百分?jǐn)?shù)(％ID/g).(3)建立鉗夾傷視神經(jīng)損傷模型,分為對(duì)照組及CNTF實(shí)驗(yàn)組,通過(guò)電鏡、光鏡觀察視網(wǎng)膜各層及視神經(jīng)形態(tài),分為對(duì)照組及CNTF實(shí)驗(yàn)組,通過(guò)電鏡、光鏡觀察視網(wǎng)膜各層及視神經(jīng)形態(tài),并計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜各層細(xì)胞和測(cè)量視網(wǎng)膜各層厚度,通過(guò)電生理F-VEP檢查來(lái)了解視功能.(4)體外培養(yǎng)人RPE、RGC細(xì)胞,分離純化并鑒定,取第4代細(xì)胞接種于9

4、6孔板,加入不同濃度的CNTF或bFGF,MTT法檢測(cè)對(duì)視網(wǎng)膜兩種細(xì)胞生長(zhǎng)的影響;LEC培養(yǎng)液中加入CNTF,光鏡觀察形態(tài).(5)選用正常成年兔,實(shí)驗(yàn)分為3組,玻璃體內(nèi)注射不同劑量的CNTF,注射后每天直接檢眼鏡觀察眼底,光鏡、電鏡觀察視網(wǎng)膜及角膜,電生理了解視網(wǎng)膜功能;光鏡觀察肝腎重要臟器的改變.(6)SPSS 10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.結(jié)論:(1)神經(jīng)損傷后CNTF-mRNA的表達(dá)先短暫升高以后持續(xù)下調(diào),而CNTFRα-mRNA在損傷后