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1、近些年來(lái),國(guó)內(nèi)外有關(guān)學(xué)者在積極研究天然、保健、安全的藥食兩用植物,而桑葉正屬于此研究范圍。桑葉始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,為??浦参锷orus alba L.的干燥葉。本品性寒、味甘苦,具有疏散風(fēng)熱、清肺潤(rùn)燥、清肝明目的功能,是常用中藥之一?,F(xiàn)代研究表明桑葉具有降血糖,降血脂、抗粥樣硬化、抗炎抗衰老,抗病毒等藥理作用。本文以桑葉作為研究對(duì)象,提取純化得到了桑葉總酚和總生物堿兩個(gè)有效部位。通過查閱相關(guān)文獻(xiàn),優(yōu)化出從桑葉中提取純化得到總酚和總生
2、物堿的最佳工藝參數(shù)。這對(duì)研制出新型中藥治療糖尿病藥物有著重要的應(yīng)用價(jià)值?;诖?,所做工作如下:
1,用四種方法對(duì)桑葉提取溶劑和提取方式進(jìn)行了篩選,堿水回流和堿水滲漉提取液中蘆丁含量很低,醇提取液中蘆丁和綠原酸含量大于水提液中兩倍以上。利用正交實(shí)驗(yàn)法篩選出最佳提取工藝,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,最佳提取條件為:加70%乙醇量12倍與10倍、提取兩次、提取時(shí)間2小時(shí)。
2,對(duì)常用的兩種型號(hào)陽(yáng)離子樹脂進(jìn)行了比較,732型陽(yáng)離子樹脂DN
3、J轉(zhuǎn)移率較高,但是重復(fù)使用的效果極差,而D001型樹脂重復(fù)使用效果很好;通過單因素實(shí)驗(yàn)篩選出桑葉中總生物堿最佳純化參數(shù):所用陽(yáng)離子樹脂為D001,最佳樹脂量為1.2BV。陽(yáng)離子樹脂吸附洗脫最佳參數(shù)為:上樣流速10 mL/min,樹脂溶脹時(shí)間9小時(shí),氨水洗脫濃度2%,洗脫體積4BV。陰離子樹脂吸附洗脫最佳參數(shù)為樹脂量2BV。三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DNJ含量x±s為(25.8±1.5)%,工藝穩(wěn)定性良好。且DNJ純度較高。
3,通過靜態(tài)
4、與動(dòng)態(tài)吸附從8種大孔樹脂中篩選出AB-8作為桑葉總酚的吸附樹脂通過單因素實(shí)驗(yàn)篩選出桑葉中總酚最佳純化參數(shù):一次大孔樹脂工藝參數(shù):大孔樹脂型號(hào)為AB-8,上樣pH2.0,藥液濃度0.25g.mL-1,上樣量0.8BV,0.5%氨水洗脫體積3BV;大孔樹脂二次吸附洗脫最佳參數(shù)為上樣量1.25BV、50%乙醇洗脫體積3BV。三次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明總酚含量x±s為(52±1.5)%,工藝穩(wěn)定性良好,得到桑葉總酚純度較高。
4,采用HPLC-
5、ESI-MS對(duì)桑葉總酚部位的主要化學(xué)成分進(jìn)行了定性分析。采用HPLC-ESI-MSn聯(lián)用技術(shù),通過質(zhì)譜斷裂和紫外吸收光譜等途徑初步鑒定了桑葉總酚部位中的主要的12個(gè)化合物:新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酰莽草酸(同分異構(gòu)體)、蘆丁、異槲皮苷、槲皮素-3-O-(6”-O-乙?;?-β-D-吡喃葡萄糖、山奈酚-3-O-蕓香糖苷、紫云英苷、山奈酚-3-O-(6”-O-乙?;?-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素和山奈酚。
5,采用UPL
6、C-ESI-MS對(duì)桑葉總生物堿部位的主要化學(xué)成分進(jìn)行了定性分析。采用UPLC-ESI-MS聯(lián)用技術(shù),通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)和對(duì)照品比對(duì)等途徑初步鑒定了桑葉生物堿部位中的主要的4個(gè)化合物:2-O-β-Glc-DAB、DNJ、蕎麥堿和N-甲基-1-DNJ。
6,通過中試放大實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)室小試工藝的穩(wěn)定性,按照實(shí)驗(yàn)室小試工藝流程和參數(shù)進(jìn)行放大,中試桑葉用量10Kg,結(jié)果中試實(shí)驗(yàn)所得總酚干浸膏得率總體在14%以上,總酚純度大于50%;總生物堿
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