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文檔簡介
1、甜葉菊為菊科甜菊屬多年生草本植物。其中含有豐富的甜菊苷類和黃酮類成分,前者在食品和醫(yī)藥行業(yè)具有良好的應用前景,而后者又具有良好的藥理作用。為了充分利用該資源,本論文從甜葉菊有效部位的制備工藝考察、化學成分的分離鑒定和質(zhì)量控制方法的建立三方面展開對甜葉菊的全面研究。 第一部分文獻綜述對甜葉菊的化學成分,生物活性及開發(fā)利用進行了全面綜述。 第二部分實驗研究 第一章甜葉菊有效部位制備工藝研究 1.建立了甜葉菊(
2、甜菊苷類+黃酮類)有效部位的制備工藝。 采用L9(3<'4>)正交實驗,以可見分光光度法測定總黃酮的含量,以高效液相色譜法分別測定槲皮苷和甜菊苷的含量,對甜葉菊的提取工藝進行考察。綜合分析實驗結(jié)果,確定甜葉菊(甜菊苷類+黃酮類)有效部位最佳提取工藝為A<,2>%乙醇提取B<,3>次,每次提取C<,1>小時,溶劑用量為D<,3>倍量。通過對5種不同極性大孔吸附樹脂的篩選,確定C型大孔吸附樹脂對總黃酮和指標性成分甜菊苷和槲皮苷具有較
3、好的富集純化性能。其最佳工藝為選用C型樹脂:上樣濃度為C<,4>;上樣量和樹脂體積比為E<,2>;樹脂柱徑高比為L<,2>;吸附流速為D<,1>;水洗體積為B<,1>;洗脫流速為F<,1>;洗脫溶劑為S%乙醇;洗脫體積為WBV;樹脂可重復使用7次。 2.建立了甜葉菊(黃酮類)和甜葉菊(甜菊苷類)兩個有效部位的綜合制備工藝 本工藝利用聚酰胺對具有酚羥基的成分的特異吸附性能,同時富集甜葉菊中的黃酮類成分和甜菊昔類成分,確定了
4、聚酰胺水洗得甜葉菊(甜菊苷類)有效部位,同時醇洗得甜葉菊(黃酮類)有效部位的制備工藝。確定聚酰胺最佳工藝為:上樣濃度為C<,2>;上樣量和聚酰胺體積比為E<,1>;柱床徑高比為L<,2>;吸附流速為D<,1>;水洗體積為B<,1>;洗脫流速為F<,1>;洗脫溶劑為P%乙醇;洗脫體積為MBV;聚酰胺可重復使用5次。 第二章甜葉菊(甜菊苷類+黃酮類)有效部位化學成分研究 采用多種分離純化方法(正相硅膠柱層析;聚酰胺,Toyo
5、pearlHW-40,Pharmadex LH-20,反相RP-18柱層析,以及重結(jié)晶等方法)和結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)(如UV、IR、FAB-MS、<'1>HNMR、<'13>CNMR、DEPT、HMQC、HMBC、<'1>H-XHCOSY等波譜學技術(shù)和化學方法對甜葉菊(甜菊苷類+黃酮類)有效部位化學成分進行了系統(tǒng)研究,共分離鑒定出12個化合物。其中黃酮7個:木犀草素,槲皮素,木犀草素-7-O-β-D葡萄糖苷,芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷,槲
6、皮苷,槲皮素-3-O-β-D-阿拉伯糖苷,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡酰基-α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷];鞣質(zhì)1個:4,5-雙咖啡酰奎寧酸;甾類2個:β-谷甾醇,△5,22豆甾二烯醇;萜類2個:甜菊苷,萊鮑迪苷.A。其中,木犀草素和4,5-雙咖啡??鼘幩?個化合物為首次從甜葉菊中分離得到,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡?;?α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]為1新黃酮類化合物。 第三章
7、甜葉菊有效部位質(zhì)量控制方法研究建立了甜葉菊有效部位質(zhì)量控制方法體系 1.建立了甜葉菊有效部位的總黃酮含量測定方法。以槲皮苷為指標性成分分析,采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色的可見分光光度法測定,甜葉菊(甜菊苷類+黃酮類)有效部位的總黃酮含量為36.69%,RSD=1.53%;甜葉菊(黃酮類)有效部位的總黃酮含量為85.52%,RSD=0.69%。 2.建立了甜葉菊有效部位的4個指標性成分含量同時測定的方法。運用RP-H
8、PLC梯度洗脫法,對甜葉菊有效部位中的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,槲皮苷,4,5-雙咖啡??鼘幩?,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡?;?α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]四個指標性成分的含量進行了測定。 3.建立了甜葉菊有效部位的2個指標性成分含量同時測定方法。運用氨基柱高效液相色譜法,對甜葉菊有效部位中的甜菊苷,萊鮑迪苷A的含量進行了測定。經(jīng)測定,甜葉菊(甜菊苷類+黃酮類)有效部位中甜菊苷含量為34.9
9、8%,RSD=1.92‰萊鮑迪苷A含量為10.20%,RSD=1.98%。甜葉菊(甜菊苷類)有效部位中甜菊苷含量為38.85%,RSD=0.63%;萊鮑迪苷A含量為16.91%,RSD=0.99%。 4.建立了甜葉菊有效部位的特征表達方法。運用氨基柱對甜葉菊有效部位的特征進行了指紋圖譜表達,并采用添加對照品的方法對甜葉菊有效部位中的10個主要色譜峰進行了指認。 第三部分總結(jié)與討論 1.對研究結(jié)果進行了總結(jié)。
10、 2.闡明了本論文的主要創(chuàng)新點 首次建立了甜葉菊有效部位Ⅰ(甜菊苷類+黃酮類)和甜葉菊有效部位Ⅱ(黃酮類)及甜葉菊有效部位Ⅲ(甜菊苷類)的三個制備工藝。 闡明了甜葉菊有效部位的主要化學成分。從甜葉菊有效部位中分離并鑒定了12個化合物,其中木犀草素和4,5-雙咖啡??鼘幩?個化合物為首次從甜葉菊中分離得到,槲皮素-3-O-[4-O-反式-咖啡?;?α-L-鼠李糖-(1→6)-β-D-半乳糖苷]為1新黃酮類化合物。
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