滇丹參抗HIV有效部位化學(xué)成分及質(zhì)量控制的研究.pdf

1、本文以滇丹參根為原料，對其有效部位的化學(xué)成分、抗HIV活性和藥材質(zhì)量控制進行了較深入的研究，研究結(jié)果如下： 1．研究了滇丹參抗HIV有效部位的化學(xué)成分。從滇丹參干燥根的水提物中，通過Diaion HP20大孔吸附樹脂、sephadex LH-20凝膠、ODS等柱層析，共分離到40個單體化合物，經(jīng)理化常數(shù)測定及光譜分析(如UV、IR、NMR、MS)等手段，鑒定了31個化合物結(jié)構(gòu)，其中多酚類化合物25個，1個脂肪酸，1個三萜，2個甾

2、體類化合物，3個丹參酮類化合物。這些化合物中，5個為新化合物，分別命名為：迷迭香酸乙酯(ethyl rosmarinate，8)、丹酚酸A乙酯(ethyl salvianolateA，10)、丹酚酸A甲酯(methyl salvianolate A，11)、cis-紫草酸(cis-lithospermic acid，14)和丹酚酸N(salvianolic acid N，24)。26個已知化合物分別鑒定為：原兒茶醛(protocatec

3、huic dehyde，1)、原兒茶酸(Drotocatechuic acid，2)、咖啡酸(caffeic acid，3)、丹參素(R-(+)-β-D-(3，4-dihydroxyphenyl)-lactic acid，4)、阿魏酸(ferulic acid，5)、迷迭香酸(rosmarinic acid，6)、迷迭香酸甲酯(methyl rosmarinate，7)、丹酚酸A(salvianolic acid A，9)、丹酚酸C(s

4、alvianolic acid C，12)、紫草酸(lithospermic acid，13)、紫草酸鎂鹽(magnesium lithospermate，15)、9L紫草酸甲酯(9'methyl lithospermate，16)、紫草酸B(1ithospermicacid B，17)、紫草酸B鎂鹽(magnesium lithospermate B，18)、9'-紫草酸B甲酯(9'-methyl lithospermate B，19

5、)、9”-紫草酸B甲酯(9'"-methyllithospermate B，20)、9'，9'"-紫草酸B二甲酯(9'，9"-dimethyl lithospermateB，21)、9'-紫草酸B乙酉旨(9'一ethyl lithospermate B，22)、yunnaneic acid E(23)、正三十二碳脂肪酸(dotriacontanoic acid，25)、齊墩果酸(oleanolicacid，26)、β-谷甾醇(β-sit

6、osterol，27)、胡蘿卜苷(daucosterol，28)、丹參酮ⅡA(tanshinone ⅡA，29)、丹參酮Ⅰ(tanshinone Ⅰ，30)和隱丹參酮(cryptotanshinone，31)?；衔?-5、7、9、12、16-22、25-28共19個為首次從該植物中得到，化合物15為首次從該屬植物中得到。 2．測定了多酚類化合物的抗HIV活性。ELISA檢測方法測定化合物抑制HIV-1整合酶(integrase

7、，IN)活性，計算IC<,50>；<'3>H標記檢測方法測定化合物抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcript，RT)活性，計算IC<,50>；MTT染色法測定化合物在MT-4細胞培養(yǎng)內(nèi)的毒性和對HIV-1 IIIB病毒株的p24抗原的抑制作用，分別計算IC<,50>,TC<,50>和SI。利用上述體外酶抑制活性和細胞模型實驗，對從滇丹參根的水提物中分離到的酚酸類各單體化學(xué)成分進行了抗HIV活性研究。結(jié)果表明，除咖啡酸、

8、迷迭香酸、紫草酸、紫草酸B和丹酚酸A已報道具有抗HIV活性外，其它的19個新的和已知的酚酸類化合物均有HIV-1整合酶抑制活性，但對HIV RT抑制效果差，細胞培養(yǎng)內(nèi)有一定抑制效果。 3．建立了滇丹參和正品丹參藥材中5個活性酚酸類成分(yunnaneic acid E，迷迭香酸，紫草酸，紫草酸B和丹酚酸A)的HPLC測定方法。利用該方法對不同品種和產(chǎn)地的丹參藥材進行了含量測定，同時比較了這5個成分在9個不同品種和產(chǎn)地丹參藥材中的

9、含量差異。結(jié)果表明：建立起來的方法快速、精度高，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率好；在測試濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好(r<'2>>0．999)，該方法為選擇具有更好抗HIV活性的丹參藥材，并區(qū)分鑒別滇丹參和正品丹參提供了依據(jù)。 4．考察了溫度對丹參藥材中兩個主要酚酸類成分，紫草酸和紫草酸B的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性影響。本文通過與對照品的HPLC保留時間比較，并根據(jù)酚酸類化合物電噴霧離子質(zhì)譜特點，利用LC-MS技術(shù)分別對紫草酸和紫草酸B在100℃加熱7h

10、后的各自轉(zhuǎn)化產(chǎn)物及其轉(zhuǎn)化方式進行了分析。結(jié)果顯示：常溫下兩者結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，而高溫加熱條件下，兩者結(jié)構(gòu)都不穩(wěn)定，轉(zhuǎn)化為其它產(chǎn)物；隨加熱溫度升高和時間延長，紫草酸逐步轉(zhuǎn)化為丹酚酸A、丹酚酸C和原兒茶醛等成分；紫草酸B則轉(zhuǎn)化為紫草酸和丹參素等產(chǎn)物，且轉(zhuǎn)化產(chǎn)物都越來越復(fù)雜。這些結(jié)果為丹參及其制劑的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。 5．考察了紫草酸和紫草酸B加熱前后，其體外抗HIV整合酶活性。藥理實驗結(jié)果表明，與丹參素、丹酚酸A、丹酚酸C、紫草酸和紫草酸