2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩54頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、三-(β-氯乙基)磷酸酯(Tris(2-chloroethyl)phosphate,TCEP)作為優(yōu)良的阻燃增塑劑,廣泛用于建筑材料、家具、兒童玩具、電子產(chǎn)品和食品包裝袋等產(chǎn)品的制造過程中。TCEP作為添加劑與材料主要以非化學(xué)鍵方式結(jié)合,因此,會隨著產(chǎn)品的不斷磨損或長時間的使用而揮發(fā)到環(huán)境中,且在自然條件下極難降解。TCEP可通過空氣吸入、飲食攝入和皮膚接觸等多種途徑進(jìn)入體內(nèi)。已有大量研究發(fā)現(xiàn),TCEP具有生殖毒性和發(fā)育毒性,能夠影響心

2、臟、肝臟、腎臟和睪丸等器官的發(fā)育。近些年也有少量關(guān)于TCEP神經(jīng)毒性的報道,但有關(guān)TCEP對神經(jīng)細(xì)胞的毒性作用機(jī)制尚不清楚。大腦是機(jī)體中代謝活性最旺盛的器官,需要大量的ATP供能,線粒體通過呼吸作用氧化葡萄糖產(chǎn)生ATP,以滿足腦細(xì)胞的功能活動需求,因此線粒體的功能活動正常,對腦結(jié)構(gòu)和功能正常具有重要的意義。而線粒體在合成ATP過程中會釋放活性氧自由基(Reactive oxide species,ROS),過量的ROS可導(dǎo)致細(xì)胞過氧化損

3、傷。已有報道TCEP可誘導(dǎo)細(xì)胞的氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)異常。細(xì)胞中ROS主要產(chǎn)生于線粒體,但目前為止,尚無TCEP對神經(jīng)細(xì)胞線粒體功能影響的報道。因此,本研究以小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞系(N2a)為實驗材料,探討TCEP是否可以誘導(dǎo)線粒體的過氧化損傷及可能的機(jī)制,以及TCEP對自噬調(diào)節(jié)蛋白HDAC6表達(dá)和活性的影響,以期為TCEP的神經(jīng)毒性作用研究提供新的實驗數(shù)據(jù)。
  本試驗用不同濃度的TCEP(25、50、75、100μM)分別處理N2

4、a細(xì)胞24hr后,通過CCK-8法檢測TCEP對細(xì)胞活性的影響;并利用DCFH-DA法、TBARS比色法和羥胺法分別檢測細(xì)胞中ROS水平、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性的變化,以判斷TCEP是否對細(xì)胞造成過氧化損傷。用25或50μM抗氧化劑維生素E(Vitamin E,VitE)預(yù)處理細(xì)胞1hr后,再用50μMTCEP處理24hr,使用DCFH

5、-DA法檢測線粒體中ROS水平,利用JC-1技術(shù)檢測線粒體膜電位的改變,又通過比色法檢測線粒體功能的相關(guān)指標(biāo)Ca2+-ATPase、細(xì)胞色素c(Cyt c)氧化酶活性的變化,來判斷線粒體的過氧化損傷的可能機(jī)制;使用免疫印跡技術(shù)檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Caspase-9、Caspase-3含量的改變,以探討線粒體依賴的細(xì)胞凋亡過程的變化;利用免疫印跡技術(shù)檢測自噬相關(guān)蛋白HDAC6和Ac-tubulin含量的改變,此外,又通過比色分

6、析HDAC6活性的變化,采用免疫熒光標(biāo)記和激光共聚焦技術(shù)觀察細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的變化,來探究TCEP對自噬途徑的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1)隨著TCEP濃度增加,細(xì)胞活性逐漸下降。(2)與對照組相比,細(xì)胞中ROS水平、MDA含量以及SOD活性呈TCEP濃度依賴性上升,但SOD與MDA的相對比值則表現(xiàn)出TCEP濃度依賴性下降的趨勢。(3)與對照組相比,隨著TCEP濃度的增加,線粒體內(nèi)ROS水平逐漸上升。(4)與對照組相比,加50μMTCEP處理后,熒

7、光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),發(fā)出紅色熒光信號的細(xì)胞數(shù)量明顯減少,提示線粒體膜電位下降;此外,線粒體膜上Ca+-ATPase活性和Cytc氧化酶活性與對照組相比均顯著性下降(P<0.01,P<0.05)。(5)與對照組相比,50μM TCEP處理組,抗凋亡因子Bcl-2蛋白含量顯著減少(P<0.01),Caspase-9的活性片段增加,且活化的Caspase-3蛋白含量顯著性增多(P<0.01)。(6)與對照組相比,50μM TCEP處理后,HD

8、AC6的表達(dá)量沒有明顯改變。但是,HDAC6的活性顯著下調(diào)(P<0.01),且HDAC6的去乙酰化底物tubulin的乙?;揎楋@著增加(P<0.01)。(7)利用激光共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),對照組細(xì)胞中微管成厚束狀分布,而50μM TCEP處理后,胞內(nèi)的微管密度減少且細(xì)胞微管網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)瓦解。(8)VitE預(yù)處理能夠阻止50μM TCEP所引起的線粒體過氧化損傷,凋亡相關(guān)蛋白的變化,HDAC6活性的下調(diào),tubulin乙?;揎椛险{(diào)以及微管

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論