過敏性哮喘氣道炎性細胞浸潤與IL-10及IL-17水平變化的研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　過敏性哮喘在近幾年發(fā)病率有增高趨勢。研究顯示，過敏性哮喘是由多種細胞及細胞因子參與的一種頑固性慢性呼吸道疾病，以氣道高反應性和氣道重構(gòu)為主要特征，氣道炎癥是過敏性哮喘的基本病理改變。氣道炎癥表現(xiàn)為炎性細胞在氣道浸潤聚集，炎性細胞包括淋巴細胞、嗜酸性細胞、中性粒細胞、內(nèi)皮細胞及巨噬細胞等，此外還有多種細胞因子及炎性介質(zhì)。
　　大量文獻表明免疫細胞及其產(chǎn)生的細胞因子在哮喘的發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用，其中以C

2、D4+T細胞亞群（Th1、Th2、Th17和調(diào)節(jié)性CD4+T細胞）比例的改變和IL-5、IL-10、IL-17等細胞因子的變化尤為突出。IL-10通過對炎癥細胞活化、增殖和細胞因子分泌的直接抑制作用，抑制 T細胞應答和特異性IgE分泌，而抑制氣道炎癥，最終起到抑制過敏性哮喘的作用。Th17的主要作用與炎癥相關(guān)，Th17通過分泌炎癥性細胞因子 IL-17而發(fā)揮作用。IL-17引起中性粒細胞的聚集和集落刺激因子的分泌，又可以促進生成粒細胞，

3、與一些自身免疫性疾病及炎癥反應的發(fā)作與其有密切關(guān)系。近年來一個研究熱點的是Th17細胞及 IL-17因子與慢性炎癥疾病及自身免疫性疾病的關(guān)系。研究表明，中性粒細胞數(shù)量及血清 IL-17水平與過敏性哮喘患者及重癥患者的炎癥嚴重程度成正相關(guān)，可能患者的氣道高反應也與之有關(guān)。臨床上使用糖皮質(zhì)激素治療時可以明顯減輕患者的氣道炎癥。IL-17導致氣道局部炎癥持久存在或范圍擴大是過敏性哮喘的發(fā)病機制中的關(guān)鍵因素。
　　為進一步探討過敏性哮喘氣

4、道炎性細胞浸潤與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，本課題以臨床過敏性哮喘患者為研究對象，收集肺泡灌洗液（BALF）并對其進行細胞計數(shù)及分類，使用流式細胞儀對外周血中單個核細胞（PBMC）的 Th1、Th2及Th17細胞進行檢測，使用酶聯(lián)免疫和熒光定量PCR對外周血中的IL-10及IL-17水平和PBMC中的IL-10 mRNA以及IL-17 mRNA水平進行檢測。研究過敏性哮喘患者氣道炎性細胞浸潤后 IL-10及 IL-17的變化，為過敏性哮喘臨床的

5、診斷治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　1．研究對象：分為兩組。哮喘組哮喘組為記錄完整的未經(jīng)過規(guī)范化治療的30例過敏性哮喘患者，對照組為年齡相仿的正常健康志愿者30例。
　　2．肺泡灌洗液中炎癥細胞檢測：收集肺泡灌洗液，離心，取沉渣進行細胞計數(shù)及白細胞分類。
　　3．肺泡灌洗液上清IgE水平檢測：收集肺泡灌洗液，離心，取上請，使用ELISA法檢測IgE水平。
　　4．血清IL-10、IL-17水平檢測：抽取外周

6、血，分離血清，使用ELISA法對IL-10及IL-17水平進行測定。
　　5．外周血PBMC中的IL-10及IL-17 mRNA檢測：抽取外周血，分離單個核細胞（PBMC），提取RNA，使用PCR熒光定量對IL-10及IL-17 mRNA進行測定。
　　6．外周血PBMC Th1、Th2及Th17細胞亞群測定：使用流式細胞儀分析外周血PBMC中的Th1、Th2及Th17細胞亞群。
　　結(jié)果：
　　1.哮喘組 BA

7、LF中細胞總數(shù)46.45±4.07較對照組0.95±0.89多，淋巴細胞百分比（78.05±4.39）％明顯高于對照組（0.20±0.52）%，嗜酸性粒細胞百分比（19.75±3.20）%明顯高于對照組（0.10±0.22）%，且兩組之間都具有統(tǒng)計學意義。
　　2.哮喘組BALF中IgE水平7.56±2.01明顯高于對照組2.68±1.32，兩組差異具有統(tǒng)計學意義。
　　3.哮喘組血清 IL-10水平8.64±0.98與對照

8、組25.05±1.29相比有所下降，而哮喘組血清 IL-17水平7.67±2.35顯著高于與對照組2.97±1.40。哮喘組外周血PBMC中的IL-10 mRNA水平0.384±0.459與對照組0.876±0.512相比有所下降,哮喘組外周血 PBMC中的 IL-17 mRNA水平0.674±0.481顯著升高與對照組0.289±0.265，哮喘組與對照組相比都有統(tǒng)計學意義。
　　4.哮喘組外周血 PBMC中的 CD4+IL-4

9、+細胞水平10.79±2.16與對照組4.11±1.03相比明顯升高，同時 CD4+IL-17A+細胞水平3.94±0.59與對照組1.13±0.59相比明顯升高，而 CD4+IFN-γ+細胞水平2.68±1.32與對照組13.57±3.56比較明顯的降低，兩者相比都具有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)論：
　　過敏性哮喘氣道炎性細胞浸潤伴隨肺泡灌洗液炎性細胞增加、IgE水平增高和 Th2、Th17細胞增加，因此，IL-10和 IL-1