哮喘PBMC源性IL-10變化及IL-10對(duì)哮喘T淋巴細(xì)胞源性IL-4、IFN-γ的影響和機(jī)制.pdf

1、目的:探討支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱哮喘,asthma)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(pefipheral blood monouclear cells,PBMC)分泌白細(xì)胞介素-10(interleukin.10,IL.10)水平及IL.10對(duì)哮喘T淋巴細(xì)胞源性白細(xì)胞介素-4(interleukin一4,IL一4)、干擾素-γ(interferon-γ,IFN-7)影響和可能機(jī)制。 方法:選取哮喘患者和健康對(duì)照者各10名,抽取外周血15m1分離

2、PBMC,加含10[％]胎牛血清、lOOU/ml青霉素和100U/ml鏈霉素、萬(wàn)分之三谷氨酰胺及50ug/ml PHA的RPMI-1640培養(yǎng)基(完全培養(yǎng)基)制成PBMC細(xì)胞懸液,取2ml PBMC細(xì)胞懸液培養(yǎng)(于飽和濕度、37℃、含5[％]CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng))48小時(shí)后用ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清液的IL-10濃度(A1組為健康對(duì)照者PBMC,A2組為哮喘患者PBMC,兩組細(xì)胞濃度皆為1x106/m1);同時(shí)取另一部分剩余的PBMC細(xì)胞

3、懸液貼壁培養(yǎng)2小時(shí)分離T淋巴細(xì)胞并按如下分組:B1組(健康對(duì)照者T淋巴細(xì)胞原液組,即于上述RPMI-1640完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)),B2組(哮喘患者T淋巴細(xì)胞原液組,仍培養(yǎng)于上述RPMI.1640完全培養(yǎng)基),B3組(哮喘患者T淋巴細(xì)胞,在B2組基礎(chǔ)上加終濃度為lOOng/ml rhIL-10培養(yǎng)),B4組(哮喘患者T淋巴細(xì)胞,在B2組基礎(chǔ)上加終濃度為1×10<'-6>mol/L地塞米松培養(yǎng)),細(xì)胞濃度均為1×10<'6>/ml。將上述分組

4、細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí),然后用ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清液IL-4、IFN-γ濃度,計(jì)算IL4與IFN-γ比值,并用細(xì)胞免疫化學(xué)染色檢測(cè)T淋巴細(xì)胞內(nèi)核因子-kb(nuclear factor-kappaB，NF—KB)表達(dá)及活化情況。用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，測(cè)定值采用均數(shù)4-標(biāo)準(zhǔn)差(X士S)表示。在方差齊性基礎(chǔ)上，α=0.05，雙側(cè)P

5、);且B2組T淋巴細(xì)胞NF-KB活性(活話率)與A2組上清液IL-10濃度呈負(fù)相關(guān)(r=-0.80，P<0.01)。T淋巴細(xì)胞NF-KB表達(dá)率：B2組和B3組>B4組>B1組(均P<0.01)，B2組和B3組比較無(wú)差異(>0.05);B4組NF-KB表達(dá)率仍高于活化率(P<0.05)；T淋巴細(xì)胞NF-KB活性(活化率)、上清液IL-4濃度：B2組>B3組和B4組及B1組(均PB1組(均P<0.05)，而B(niǎo)3

6、組和B4組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；T淋巴細(xì)胞上清液IFN-γ濃度：B1組>B2組(PB3組和B4組(均P<0.05)，B3組和B4組比較無(wú)差異(P>0.05)；IL-4／IFN-γ比值：B2組>B3組和B4組>B1組(均P<0.01)，B3組B4組間無(wú)顯著差異(P>O.05)；哮喘T淋巴細(xì)胞NF-KB活性與上清液IL-4濃度及IL-4／IFN-γ比值均呈正相關(guān)(r==O.8

7、13，r=0.764，均P<0.01)，但與上清液IFN-γ濃度不相關(guān)(r==0.332，P>0.05)。 結(jié)論： 1．哮喘患者PBMC分泌IL-10水平減低； 2．哮喘患者T淋巴細(xì)胞IL-4水平、IL-4／IFN-γ比值明顯升高，而IFN-γ則明顯降低；哮喘患者T淋巴細(xì)胞NF-kB表達(dá)及活性明顯升高； 3．IL-10和地塞米松均抑制哮喘T淋巴細(xì)胞分泌IL-4、改善IL-4／IFN-γ比值，且100ng／