茵梔黃注射液基于FXR通路治療肝內(nèi)膽汁淤積的機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　肝內(nèi)膽汁淤積屬于“黃疸”，臨床上陽黃證較為常見。疏肝利膽退黃法為辨病論治的基本治療法則，茵陳蒿湯為治療陽黃的代表性方劑，茵梔黃注射液源于茵陳蒿湯。肝內(nèi)膽汁淤積的發(fā)病率高，國內(nèi)外診斷標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一，UDCA、SAMe、甘草酸類制劑是治療IHC的一線藥物，UDCA作用機(jī)制尚不明確，SAMe長期臨床療效和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究，經(jīng)濟(jì)效應(yīng)也有待考慮。目前主流研究認(rèn)為膽汁酸代謝的主要通路是FXR通路，F(xiàn)XR通路調(diào)控的成熟方法是

2、利用GW4064和siRNA調(diào)控。目前關(guān)于茵梔黃注射液治療黃疸的研究大多將FXR及下游基因等膜轉(zhuǎn)運(yùn)體作為同一層次的指標(biāo)，忽略了FXR是上游受體，BSEP、MDR3、MRP2、OATP2是下游靶基因的關(guān)系，對這兩個(gè)層次的相關(guān)性中醫(yī)藥研究不多。
　　目的:
　　通過研究疏肝利膽退黃法的代表藥性藥物茵梔黃注射液對HL-7702的FXR、BSEP、MDR3、MRP2、OATP2基因表達(dá)的影響，探討茵梔黃注射液治療肝內(nèi)膽汁淤積的作用機(jī)

3、制。
　　方法:
　　采用CCK8法探索不同濃度的YZH對HL-7702的活性影響，評價(jià)藥物對細(xì)胞的毒性作用，確定最佳YZH干預(yù)的最佳濃度和最佳作用時(shí)間;用GW4064和siRNA調(diào)控FXR基因的表達(dá)，采用反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，2-ΔΔCt法研究目的基因mRNA的相對表達(dá)量;采用蛋白質(zhì)免疫印跡法研究目的基因蛋白質(zhì)的相對表達(dá)量;采用免疫熒光法對FXR、BSEP、MRP2蛋白定位和定性研究。
　　結(jié)果:
　　研

4、究結(jié)果表明YZH對HL-7702的理想干預(yù)濃度1.08％(95％置信區(qū)間:0.89％～1.30％)，理想干預(yù)時(shí)間為15.47h(95％置信區(qū)間:12.92～18.54)。研究結(jié)果表明YZH對HL-7702活性的抑制作用與劑量正相關(guān)。YZH促進(jìn)FXR基因的表達(dá)(P＜0.01); YZH促進(jìn)MDR3基因的表達(dá)(P＜0.01); YZH抑制OATP2基因的表達(dá)(P＜0.01)。0.6％YZH促進(jìn)BSEP基因的表達(dá)(P＜0.05)，1.2％YZ

5、H抑制BSEP基因的表達(dá)(P＜0.01);未下調(diào)FXR基因時(shí)，YZH抑制MRP2基因的表達(dá)。下調(diào)FXR基因后，YZH促進(jìn)MRP2基因的表達(dá)(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　肝內(nèi)膽汁淤積屬于“黃疸”，臨床上陽黃證較為常見。疏肝利膽退黃法為辨病論治的基本治療法則，茵陳蒿湯為治療陽黃的代表性方劑，茵梔黃注射液源于茵陳蒿湯。YZH對HL-7702的理想干預(yù)濃度為1.08％，理想干預(yù)時(shí)間為15.47h，YZH對HL-7702活性的抑