二甲雙胍通過抑制RORγt對2型糖尿病大鼠IL-17的影響.pdf

1、2型糖尿病作為一種慢性代謝性疾病，其發(fā)病機制復雜，涉及環(huán)境與遺傳兩大方面，胰島素分泌不足及胰島素抵抗是其發(fā)病的關鍵因素。相關研究表明，2型糖尿病不僅是一種代謝性疾病，也是一種亞臨床炎癥疾病，其發(fā)病機制與慢性低度炎癥密切相關，因此提出2型糖尿病的炎癥學說。
　　大量研究證明，炎性因子、促炎性因子與T2DM密切相關，但其發(fā)病機制尚未完全闡明。近年來研究發(fā)現(xiàn)，IL-17與2型糖尿病、1型糖尿病、高血壓及代謝綜合征均有一定的相關性。IL-

2、17是一種促炎細胞因子，具有強大的招募中性粒細胞、促進多種細胞釋放炎性因子、促進細胞增值及抑制腫瘤生長等多種生物學作用，可導致炎癥反應、自身免疫性疾病等發(fā)生和發(fā)展。而IL-17也是一種重要的炎癥介質，它可以誘導其他炎癥細胞如IL-6、TNF-α等的表達，產生致炎作用。大量研究證實，無論體外還是體內，Th17分化IL-17細胞都需要RORγt的參與，證實RORγt是Th17細胞分化的關鍵正向轉錄調節(jié)因子。在活化T細胞中RORγt高表達可產

3、生大量的IL-17，并且RORγt基因敲除小鼠體內TH17細胞和IL-17明顯減少。
　　二甲雙胍于20世紀進入臨床應用，大量循癥醫(yī)學證據(jù)顯示其有良好的降糖作用，且安全性及效價比均高，目前許多權威的糖尿病指南把二甲雙胍推薦為治療2型糖尿病的一線首選藥物。近年來一些研究顯示其除了降糖作用外同時具有抗炎作用，然而其抗炎作用機制仍未完全闡明。
　　2材料和方法:
　　2.1分組及飼喂方法
　　SPF級SD雄性大鼠50只

4、，體重為89.62±7.42g。適應性喂養(yǎng)7天后，隨機分為2組，一組20只，一組30只，分別飼喂普通飼料、高脂高糖飼料，在第8周末時腹腔注射STZ，使用STZ+高脂高糖飼樣聯(lián)合造模，以30mg/kg STZ腹腔注射造模，3天后測空腹血糖，將空腹血糖大于11mmol/L視作為造模成功。將造模組隨機分為3組，每組10只，一組繼續(xù)飼喂高脂高糖（M組），一組飼喂高脂高糖+二甲雙胍（M+MET組），一組飼喂高脂高糖+胰島素(M+INS);普通飼料

5、組隨機分為2組，每組各10只，一組飼喂普通飼養(yǎng)(C)，一組飼喂普通飼料+二甲雙胍(C+MET)。MET按200mg/Kg劑量灌胃，不給予MET的大鼠使用生理鹽水灌胃。整個實驗共持續(xù)12周。
　　2.2觀察指標
　　(1)全自動血標本分析儀檢測血糖濃度及胰島素含量，計算胰島素抵抗指數(shù);
　　(2) ELISA法檢測血清中IL-17的表達水平;
　　(3) Western blotting法檢測RORγt蛋白的表達水

6、平;
　　(4) RT-PCR法檢測RORγt mRNA基因的表達;
　　(5)免疫組化觀察脾臟組織中RORγt及IL-17陽性細胞因子的表達。
　　3結果:
　　3.1 HOMA-IR
　　各組大鼠HOMA-IR水平之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=163.923，P=0.000)。M組、M+INS組和M+MET組的HOMA-IR均比C組高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。M+INS組、M+MET組的HOMA

7、-IR均比M組低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.2血清IL-17的表達水平
　　各組大鼠血清平均IL-17水平之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=59.778，P=0.000)。進一步兩兩比較，M組、M+INS組、M+MET組的IL-17水平均高于C組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。M+MET組的IL-17水平低于M組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C+MET組的IL-17水平低于M+MET組，差異有統(tǒng)計學意義

8、(P＜0.05)。M+INS組的IL-17水平高于M+MET組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C組的IL-17水平與C+MET組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。M組的IL-17水平與M+INS組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.3大鼠HOMA-IR與IL-17水平的相關性分析
　　M組，HOMA-IR與血清IL-17水平呈正相關，r=0.718，P=0.019;M+MET組，HOMA-IR與血清IL-17水平

9、呈正相關，r=0.706，P=0.022。
　　3.4各組大鼠脾臟組織RORγt mRNA的表達
　　各組大鼠脾臟組織平均RORγt mRNA水平之間的差異有統(tǒng)計學意義(F=910.176，P=0.000)。進一步兩兩比較，M組、M+INS組、M+MET組的RORγt mRNA水平均高于C組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。M+MET組的RORγt mRNA水平低于M組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C+MET組的RO

10、RγtmRNA水平低于M+MET組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。M+INS組的RORγtmRNA水平高于M+MET組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C組的RORγt mRNA水平與C+MET組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。M組的RORγt mRNA水平與M+INS組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.5各組大鼠脾臟組織RORγt蛋白的表達
　　各組大鼠脾臟組織平均RORγt蛋白表達水平之間的差異有統(tǒng)計學

11、意義(F=505.668，P=0.000)。進一步兩兩比較，M組、M+INS組、M+MET組的RORγt蛋白水平均高于C組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。M+MET組的RORγt蛋白水平低于M組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C+MET組的RORγt蛋白水平低于M+MET組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。M+INS組的RORγt蛋白水平高于M+MET組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。C組的RORγt蛋白水平與C+MET組

12、相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。M組的RORγt蛋白水平與M+INS組相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　3.6各組大鼠脾臟組織IL-17與RORγt的免疫組化表達水平
　　M組較M+INS組、M+MET組、C組、C+MET組的脾臟組織中IL-17及RORγt細胞陽性比均高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4結論:
　　(1)2型糖尿病大鼠的血清中IL-17及脾臟組織RORγt的表達水平升高。