二甲雙胍對糖尿病大鼠的骨保護作用與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系.pdf

1、【目的】
　　1.觀察二甲雙胍干預(yù)對高脂高糖聯(lián)合STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠的血糖、體重、骨密度以及骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)的影響；
　　2.觀察二甲雙胍對糖尿病大鼠的骨保護作用與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系。
　　【方法】
　　1.糖尿病模型：選用60只SD大鼠，分為正常組(n=15）和造模組（n=45），NC組予標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料，造模組予高糖高糖飼料(HSFDs)8周。造模組空腹腹腔注射1％ STZ30mg/kg，NC組予等量生理鹽水。檢測空腹血

2、糖≥16.7mmol/L者為造模成功；
　　2.藥物干預(yù)：將造模成功的30只大鼠分為2型糖尿病組（T2DM組，n=15）和二甲雙胍干預(yù)組（n=15）。造模成功2周后開始行二甲雙胍(Metformin，MF)干預(yù)。NC組及T2DM組予等計量生理鹽水，干預(yù)時間為20周，20周末檢測各組血糖、體重；
　　3.骨密度及骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)檢測：DEXA檢測全身各部位骨密度(BMD)，酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清OCN和TRACP5b活性；AMP緩沖

3、液法檢測ALP水平；
　　4.蘇木精-伊紅染色（HE染色）：HE染色觀察骨病理變化；
　　5.相關(guān)基因及蛋白的檢測：應(yīng)用RT-PCR及Western Blot測定大鼠股骨ATF6、Caspase12、CHOP、JNK的mRNA及蛋白表達情況。
　　【結(jié)果】
　　1. MF干預(yù)20周后，與NC組相比，T2DM組空腹血糖明顯升高(P<0.05)，體重減少(P<0.05)；MF組空腹血糖升高(P<0.05)，體重?zé)o明顯

4、差異(P>0.05)；與T2DM組相比，MF組空腹血糖明顯降低(P<0.05)，體重明顯升高(P>0.05)；
　　2.與NC組比較，T2DM組下肢、上肢、軀干、脊柱及全身骨密度均降低，其中以下肢、上肢、全身骨密度下降更明顯(P<0.05)，MF組下肢、上肢、脊柱及全身骨密度降低(P>0.05)，軀干骨密度升高(P>0.05)；與T2DM組比較，MF組下肢、上肢及全身骨密度升高(P<0.05)；
　　3.與NC組比較，T2D

5、M組ALP表達降低(P<0.05)、OCN表達降低(P>0.05)、TRACP5b表達升高(P<0.05)，MF組 ALP表達升高(P<0.05)，OCN表達升高(P>0.05)，TRACP5b表達升高(P<0.05)；與T2DM組比較，MF組ALP和OCN表達升高(P<0.05)，TRACP5b表達降低(P<0.05)；
　　4．HE染色后各組骨病理改變：與NC組相比，MF干預(yù)組骨小梁粗大，間距略寬，可見模糊的骨髓組織，骨髓腔變

6、窄。與T2DM組相比，MF干預(yù)組骨皮質(zhì)骨板層次清晰，結(jié)構(gòu)致密，骨細胞清晰完整，核呈圓形或者卵圓形，較大，多位于中央，空缺骨陷窩細胞少見；
　　5. MF干預(yù)20周后，與NC組相比，T2DM組大鼠股骨ATF6、CHOP、Caspase12、JNK mRNA表達均顯著增高(P<0.05)，MF組ATF6、CHOP、Caspase12、JNK mRNA表達均顯著增高(P<0.05)；與T2DM組相比，MF組ATF6、CHOP、Caspa

7、se12、JNK mRNA表達降低(P<0.05)；
　　6. MF干預(yù)20周后，與NC組相比，MF組大鼠股骨ATF6、CHOP、Caspase12、JNK蛋白表達均顯著升高(P<0.05)，與 T2DM組相比，MF組 ATF6、CHOP、Caspase12、JNK表達降低(P<0.05)。
　　【結(jié)論】
　　1.二甲雙胍可有效降低高脂高糖聯(lián)合小劑量STZ誘導(dǎo)糖尿病的大鼠空腹血糖。
　　2.二甲雙胍干預(yù)糖尿病大鼠