角膜上皮細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子促進(jìn)角膜神經(jīng)再生的作用研究.pdf

1、目的：通過(guò)正常小鼠和鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的Ⅰ糖尿病小鼠的角膜上皮損傷模型以及小鼠角膜上皮干/祖細(xì)胞-三叉神經(jīng)節(jié)感覺(jué)神經(jīng)元（TKE2細(xì)胞-TG細(xì)胞）體外共培養(yǎng)模型，檢測(cè)小鼠角膜上皮細(xì)胞中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(neurotrophic factors)的表達(dá)情況，研究其對(duì)小鼠角膜神經(jīng)再生的影響。
　　方法：用C57/BL6小鼠建立角膜上皮損傷模型，檢測(cè)并比較小鼠正常角膜（角膜上皮損傷未損傷）、再生期（角膜上皮損傷后2天）以及再生后（角膜上

2、皮損傷后7天）角膜上皮細(xì)胞中神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)。體外培養(yǎng)小鼠角膜上皮干/祖細(xì)胞（TKE2細(xì)胞），利用劃痕模型檢測(cè)正常及損傷后TKE2細(xì)胞中神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(GDNF)的表達(dá)變化。通過(guò)TKE2細(xì)胞-TG細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型，檢測(cè)三叉神經(jīng)節(jié)感覺(jué)神經(jīng)元（TG細(xì)胞）軸突生長(zhǎng)變化。利用鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)Ⅰ型糖尿病小鼠，通過(guò)角膜上皮損傷修復(fù)模型，檢測(cè)糖尿病小鼠角膜上皮中NGF和GDNF表達(dá)變化;觀察糖尿病小鼠角膜

3、上皮修復(fù)和神經(jīng)再生以及外源性NGF和GDNF對(duì)糖尿小鼠角膜上皮修復(fù)、神經(jīng)再生和角膜神經(jīng)敏感度恢復(fù)的影響。
　　結(jié)果：在角膜上皮修復(fù)和角膜神經(jīng)再生過(guò)程中，與正常角膜相比，角膜上皮中NGF和GDNF的表達(dá)在角膜上皮再生期（角膜上皮損傷后2天）顯著上升，再生后（損傷后第7天）部分恢復(fù);而NGF中和抗體或GDNF封閉多肽可顯著抑制角膜上皮損傷修復(fù)及神經(jīng)再生。與正常對(duì)照組相比，TKE2細(xì)胞損傷后（劃痕實(shí)驗(yàn)48h）NGF和GDNF的表達(dá)顯著上

4、升，且劃痕后的條件培養(yǎng)上清可以顯著促進(jìn)TG細(xì)胞軸突的生長(zhǎng);而NGF中和抗體或GDNF封閉多肽可顯著抵消TKE2條件培養(yǎng)上清的促進(jìn)TG細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的作用。微流體小室共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TKE2細(xì)胞及其條件培養(yǎng)基可以顯著促進(jìn)小鼠TG細(xì)胞的軸突的生長(zhǎng)，且呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性。
　　與正常小鼠相比，糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù)及神經(jīng)再生均顯著延遲;糖尿病小鼠再生期的角膜上皮NGF和GDNF的表達(dá)均顯著下降;而外源性給予NGF或GDNF均可顯著促進(jìn)