核內(nèi)AURKA維持乳腺癌干性的研究.pdf

1、研究背景
　　乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率仍在持續(xù)增長(zhǎng)。盡管臨床上對(duì)乳腺癌的治療策略已取得了一定成果，但是乳腺癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是難以攻克的難題。腫瘤耐藥是引起乳腺癌復(fù)發(fā)的重要原因，對(duì)臨床治療產(chǎn)生藥物抵抗的腫瘤細(xì)胞在復(fù)發(fā)后將成為更難治愈的腫瘤。腫瘤干細(xì)胞是一群具有自我更新能力和多項(xiàng)分化潛能的腫瘤起始細(xì)胞，腫瘤耐藥被認(rèn)為是由對(duì)藥物有抵抗能力的腫瘤干細(xì)胞引起的，腫瘤治療后的復(fù)發(fā)也可能是由潛伏在腫瘤組織中，增殖不活躍但具有自

2、我更新和分化能力的腫瘤干細(xì)胞介導(dǎo)的。
　　AURKA激酶是在乳腺癌等多種腫瘤組織中過表達(dá)的癌蛋白。AURKA異常激活引起細(xì)胞基因組的不穩(wěn)定和非整倍體的形成，在異常情況下促進(jìn)細(xì)胞繞過DNA損傷檢驗(yàn)點(diǎn)和紡錘體檢驗(yàn)點(diǎn)而繼續(xù)錯(cuò)誤的細(xì)胞分裂，破壞細(xì)胞極性，從而促使腫瘤發(fā)生。腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)的AURKA促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖，侵襲及轉(zhuǎn)移，與不良的腫瘤預(yù)后相關(guān)。AURKA激酶的小分子抑制劑可抑制細(xì)胞周期進(jìn)程，在體外實(shí)驗(yàn)中顯示能夠抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞，

3、然而在臨床應(yīng)用中卻沒有良好的效果。
　　研究目的
　　本課題擬探索AURKA激酶在腫瘤細(xì)胞中空間特異性的分布對(duì)乳腺癌干細(xì)胞的影響，通過多種分子生物學(xué)手段驗(yàn)證AURKA在乳腺癌細(xì)胞中核內(nèi)分布的現(xiàn)象，并探討其對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。本課題由此為出發(fā)點(diǎn)，研究腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)的AURKA非激酶依賴的活性，將AURKA激酶活性和AURKA入核能力同時(shí)抑制，為臨床治療提供新的靶向AURKA的腫瘤治療策略。
　　實(shí)驗(yàn)方法
　　通

4、過核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞質(zhì)蛋白分離，分別檢測(cè)AURKA的表達(dá)，又以免疫熒光及免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AURKA在細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中的分布情況。使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)乳腺癌干細(xì)胞的表面標(biāo)記物和酶活性，以及微球懸浮培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，探究AURKA對(duì)乳腺癌干細(xì)胞的影響。通過基因集合富集分析（GSEA），分析AURKA對(duì)腫瘤干細(xì)胞相關(guān)基因的調(diào)控作用。通過體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)，證明阻止AURKA入核可抑制腫瘤生長(zhǎng)，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)AURKA激酶抑制劑的敏感性。