MicroRNA-185-5p-STIM1通路對胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響及臨床意義的相關(guān)研究.pdf

1、胃癌是常見消化道腫瘤，全世界胃癌發(fā)病率在腫瘤發(fā)病率中排第四，胃癌致死率在全球腫瘤致死率中排在第二，胃癌中大概有50％的病人初次確診即為進展期胃癌，五年生存率不到30%。目前，胃癌的侵襲性和轉(zhuǎn)移機制仍然不是很清楚。
　　上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial-mesenchymal transition, EMT）是腫瘤轉(zhuǎn)移早期中關(guān)鍵和必須的過程。在上皮間質(zhì)化過程中，腫瘤細胞失去上皮細胞特征，包括E-cadherin的表達、細胞間的粘附

2、、上皮細胞極性，獲得間質(zhì)細胞特征，包括遷移能力和侵犯性。有研究證實，在乳癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、肺癌、胃癌中，EMT與腫瘤 TNM高分期、高復發(fā)率以及低的生存率相關(guān)。
　　microRNA(miRNA)是一類內(nèi)生的、高度保守的非編碼小RNA，長度約22個核苷酸，與靶基因的3′UTR區(qū)域特異性結(jié)合，引起其降解或抑制其翻譯，參與基因轉(zhuǎn)錄后表達水平的調(diào)控，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起到了重要的作用。miRNA與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，參與腫瘤轉(zhuǎn)移級聯(lián)，

3、有望成為新的抗腫瘤轉(zhuǎn)移治療的方法。
　　基質(zhì)相互作用分子1（Stromal interaction molecule1, STIM1）負責活化鈣庫操縱性鈣內(nèi)流（SOCE)，在腫瘤細胞的生長、遷移、血管形成、侵襲中有重要的作用。STIM1通過SOCE作用于小RAS GTP酶、小RAC GTP酶以及鈣蛋白酶調(diào)節(jié)粘著斑周轉(zhuǎn)，從而對腫瘤細胞轉(zhuǎn)移發(fā)揮作用。在結(jié)腸癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、幾種類型腫瘤中STIM1是促進EMT的關(guān)鍵分子。胃癌中S

4、TIM1是否是miR-185-5p有相互作用，其相互作用機制以及在胃癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移中所起作用及具體機制目前不清楚。
　　本研究以胃癌組織、胃癌細胞株為研究對象，應用常規(guī)病理、免疫組織化學、激光掃描共聚焦顯微鏡、細胞活性檢測試劑盒(cell counting kit-8，cck8)、流式細胞術(shù)、Transwell小室、實時熒光定量聚合酶鏈式反應（q RT-PCR）、蛋白印跡法（western blot）等方法研究microRNA-18

5、5-5p（miR-185-5p）在胃癌（及癌旁）組織中表達及其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系；研究 miR-185-5p與基質(zhì)相互作用分子1（Stromal interaction molecule1， STIM1）在胃癌組織、胃癌細胞中表達的相關(guān)性；觀察miR-185-5p在不同分化的胃癌細胞株中的表達；研究miR-185-5p對胃癌細胞鈣池操縱性鈣離子內(nèi)流（Store-operated Ca2+entry，SOCE)的影響及其對胃癌細胞生

6、物學行為的影響；通過檢測上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標記物上皮鈣黏附蛋白（E-cadherin），神經(jīng)鈣黏附蛋白（N-cadherin），波形蛋白（Viminten）的變化來研究miR-185-5p、STIM1、SOCE在胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用及其具體機制。研究STIM1在胃癌組織及胃癌細胞中的表達、臨床病理意義及其對胃癌細胞生物學行為的影響。闡明miR-185-5p、STIM1、SOCE在胃癌增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，為胃癌的分子靶向性治療提供新的

7、依據(jù)。
　　本研究共分為三部分：
　　第一部分：miR-185-5p-STIM1-SOCE通路對胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響的相關(guān)研究
　　目的：驗證胃癌細胞中miR-185-5p負性調(diào)控STIM1，探討miR-185-5p對鈣庫操縱性 Ca2+內(nèi)流的影響，探討 miR-185-5p與 SOCE抑制劑SKF96365對胃癌細胞的增殖、遷移、侵襲生物學行為的影響以及與胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。
　　方法：
　

8、　1.利用 qRT-PCR和免疫組化方法檢測胃癌組織中 miR-185-5p和STIM1表達的相關(guān)性。qRT-PCR檢測人胃粘膜上皮細胞GES-1和常見胃癌細胞株中miR-185-5p的表達。SGC-7901細胞轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimics和BGC-823細胞轉(zhuǎn)染miR-185-5p inhibitor，利用qRT-PCR和Western-blot方法檢測miR-185-5p和STIM1表達的相關(guān)性。
　　2.SGC-7

9、901細胞轉(zhuǎn)染 miR-185-5p mimics和 BGC-823細胞轉(zhuǎn)染miR-185-5p inhibitor，應用共聚焦顯微鏡檢測 miR-185-5p對鈣庫操縱性Ca2+內(nèi)流的影響。
　　3.通過 CCK法檢測 miR-185-5p與 SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和 BGC-823細胞的增殖情況。應用 Transwell小室檢測細胞miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-79

10、01和BGC-823細胞的遷移、侵襲情況。
　　4.利用 qRT-PCR和 Western-blot檢測 miR-185-5p與 SOCE抑制劑SKF96365對SGC-7901和BGC-823細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標記物上皮鈣黏附蛋白、神經(jīng)鈣黏附蛋白、波形蛋白的影響。
　　結(jié)果：
　　1.驗證胃癌組織中 miR-185-5p與 STIM1表達相關(guān)性。胃癌組織中miR-185-5p表達量相對于癌旁組織顯著低表達，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

11、和TNM高分期相關(guān)。STIM1免疫組化染色陽性標本中 miR-185-5p表達明顯低于STIM1免疫組化染色陰性標本，P=0.004。
　　2.miR-185-5p在不同胃癌細胞株中的表達水平。以GES-1為對照， miR-185-5p在胃癌細胞SGC-7901、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS為低表達。miR-185-5p在 BGC-823細胞中表達相對稍高，在SGC-7901相對較低。轉(zhuǎn)染 miR-185-

12、5p inhibitor敲低 BGC-823中miR-185-5p表達、轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimics上調(diào)SGC-7901中miR-185-5p表達進行后續(xù)試驗。
　　3.miR-185-5p負性調(diào)控胃癌細胞STIM1表達水平。SGC-7901細胞中miR-185-5p過表達后，STIM1的mRNA和蛋白水平的表達量下降，與陰性對照組相比，P<0.01。敲除BGC-823細胞的miR-185-5p表達后，STIM1的mRN

13、A和蛋白水平的表達量上調(diào)，與陰性對照組相比，P<0.01。
　　4.miR-185-5p對鈣庫操縱性 Ca2+內(nèi)流的影響。Fluo-4/AM熒光探針法檢測過表達 miR-185-5p的SGC-7901細胞和敲低 miR-185-5p的BGC-823細胞中 SOCE的變化。實驗結(jié)果顯示，過表達 miR-185-5p的SGC-7901細胞，相對于陰性對照組， TG激活的Ca2+振幅變化不明顯（P>0.05），加入鈣離子激活的SOCE顯

14、著降低，有統(tǒng)計學意義，P<0.01。敲低miR-185-5p的BGC-823細胞，相對于陰性對照組，加入TG后激活的Ca2+振幅變化不明顯，加入鈣離子激活的SOCE顯著增高，P<0.01。
　　5.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和BGC-823細胞增殖的影響。應用CCK8法對胃癌細胞BGC-823和SGC-7901增殖進行檢測。SGC-7901細胞，相對于陰性對照組，miR-185-5p

15、mimics組的增殖能力下降；陰性對照組、miR-185-5p mimics組的OD值24h時間點分別為0.736±0.0743、0.596±0.012，P=0.000；48h為0.826±0.0912 VS0.663±0.0393，P=0.002；72h為0.816±0.159 VS0.648±0.047，P=0.015。BGC-823細胞，相對于陰性對照組，miR-185-5p inhibitor組的增殖能力增強；陰性對照組、miR

16、-185-5p mimics組的OD值24h時間點分別為1.538±0.087、1.673±0.123， P=0.031；48h為1.564±0.067 VS1.994±0.397， P=0.007；72h為1.582±0.293 VS2.02±0.185，P=0.003。在細胞培養(yǎng)液中加入終濃度為1.5uM的SOCE抑制劑SKF96365，上述miR-185-5p對胃癌SGC-7901、BGC-823的增殖能力的影響現(xiàn)象消失，P>0.

17、05。
　　6.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和BGC-823細胞遷移的影響。在轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimcs或miR-185-5p inhibitor及陰性對照48h后，應用 Transwell遷移模型對胃癌細胞 SGC-7901和BGC-823遷移進行檢測。SGC-7901的miR-185-5p mimics組遷移能力明顯低于陰性對照組；BGC-823的miR-185-5p in

18、hibitor組遷移能力明顯高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。在同時予以SKF96365處理后，上述的差異則不明顯，P>0.05。
　　7.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和BGC-823細胞侵襲的影響。在轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimcs或miR-185-5p inhibitor及陰性對照48h后，應用 Transwell侵襲模型對胃癌細胞 SGC-7901和BGC-823

19、遷移進行檢測。SGC-7901的miR-185-5p mimics組侵襲能力明顯低于陰性對照組；BGC-823的miR-185-5p inhibitor組侵襲能力明顯高于陰性對照組，差異有統(tǒng)計學意義，P<0.01。在同時予以SKF96365處理后，上述的差異則不明顯，P>0.05。
　　8.miR-185-5p與SOCE抑制劑 SKF96365對SGC-7901和 BGC-823的E-cadherin、N-cadherin、Vim

20、inten表達的影響。在轉(zhuǎn)染miR-185-5p mimcs或miR-185-5p inhibitor及陰性對照24h后，應用qRT-PCR檢測胃癌細胞SGC-7901和 BGC-823中 STIM1、E-cadherin、N-cadherin、Viminten的mRNA的表達。轉(zhuǎn)染成功48h后, Western blot檢測SGC-7901、BGC-823細胞STIM1、E-cadherin、 N-cadherin以及Vimiten蛋

21、白水平的表達。實驗結(jié)果顯示在miR-185-5p mimics升高SGC-7901細胞miR-185-5p表達后， STIM1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平表達明顯下降，而N-cadherin和 Vimiten的mRNAh和蛋白水平表達明顯升高， P<0.01。利用miR-185-5p inhibitor抑制 BGC-823細胞 miR-185-5p的表達后，STIM1和E-cadherin的mRNA和蛋白水平表達明顯升高，

22、而N-cadherin和Vimiten的mRNA和蛋白水平表達則明顯下降，P<0.01。在給予 SOCE抑制劑SKF96365后，在miR-185-5p過表達的SGC-7901細胞、miR-185-5p敲低的BGC-823細胞STIM1的mRNA和蛋白表達量與miR-185-5p表達成負相關(guān)，但上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標記物 E-cadherin、 N-cadherin以及 Vimiten的mRNA和蛋白表達相對于陰性對照組沒有明顯差異，P>0.0

23、5。
　　小結(jié)：
　　1.miR-185-5p在胃癌細胞株、胃癌組織中低表達。胃癌組織中miR-185-5p表達量相對于癌旁組織顯著低表達，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM高分期相關(guān)。胃癌組織中miR-185-5p與STIM1表達量呈負性相關(guān)。
　　2.miR-185-5p mimics能成功轉(zhuǎn)染SGC-7901，上調(diào)miR-185-5p表達。miR-185-5p inhibitor能成功轉(zhuǎn)染 BGC-823細胞，下調(diào)miR-18

24、5-5p的表達水平。
　　3. miR-185-5p負性調(diào)控SGC-7901、BGC-823細胞的STIM1表達及SOCE振幅。
　　4.過表達miR-185-5p能抑制SGC-7901細胞的增殖，敲除miR-185-5p能促進 BGC-823細胞的增殖。SOCE抑制劑 SKF96365能消除miR-185-5p對SGC-7901和BGC-823細胞增殖的影響。
　　5.過表達 miR-185-5p能抑制 SGC-79

25、01細胞的遷移及侵襲，敲除miR-185-5p能促進BGC-823細胞的遷移及侵襲。miR-185-5p對SGC-7901和BGC-823細胞遷移、侵襲的影響，在予以SOCE抑制劑 SKF96365處理后沒有統(tǒng)計學意義。
　　6. miR-185-5p負性調(diào)控STIM1、SOCE來調(diào)節(jié)SGC-7901、BGC-823細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。SOCE抑制劑 SKF96365能消除 miR-185-5p對SGC-7901和BGC-823細

26、胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響。
　　第二部分：STIM1對胃癌細胞增殖、凋亡、遷移、侵襲及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化影響的研究
　　目的：研究STIM1對胃癌細胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲等生物學行為的影響，驗證STIM1與胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.利用qRT-PCR和Western-blot檢測了人胃粘膜上皮細胞GES-1和常見胃癌細胞株中STIM1的表達。
　　2.選擇胃癌細胞株中 STIM1表達最高

27、的BGC-823及相對較低的SGC-7901做后續(xù)的實驗。采用瞬時轉(zhuǎn)染的方法，將 STIM1-siRNA或陰性對照轉(zhuǎn)入SGC-7901、BGC-823，通過CCK法檢測胃癌細胞的增殖情況，流式細胞儀檢測細胞凋亡情況，應用Transwell小室檢測細胞遷移、侵襲情況。
　　3.利用qRT-PCR和Western-blot檢測STIM1對胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標志物上皮鈣黏附蛋白、神經(jīng)鈣黏附蛋白、波形蛋白的影響。
　　結(jié)果：

28、>　　1.不同胃癌細胞株中STIM1的表達水平。相對于GES-1，STIM1在SGC-7901、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS中過表達。BGC-823中STIM1表達最高，SGC-7901相對較低。
　　2.轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA的BGC-823和SGC-7901中STIM1表達水平。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)以STIM1-siRNA轉(zhuǎn)染BGC-823和SGC-7901，再以qRT-PCR、Western-blo

29、t法檢測STIM1的表達，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA的BGC-823和SGC-7901中，STIM1表達顯著低于陰性對照和空白對照組，P<0.01，提示轉(zhuǎn)染成功，可行后續(xù)試驗。
　　3.敲除STIM1對胃癌細胞SGC-7901和BGC-823增殖的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照24h、48h、72h后，應用CCK8法對胃癌細胞BGC-823和SGC-7901增殖進行檢測。SGC-7901細胞24hNC組、si

30、RNA組的OD值分別為0.809±0.073、0.801±0.0145，24h時間點無統(tǒng)計學意義， P=0.938；48h NC組、siRNA組的OD值分別為0.96±0.34、0.65±0.184， P<0.05；72h NC組、siRNA組的OD值分別為0.938±0.259、0.874±0.215， P<0.01。BGC-823細胞24h NC組、siRNA組的OD值分別為1.563±0.195、1.332±0.0654，P<0.

31、05；48h NC組、siRNA組的OD值分別為1.699±0.142、1.425±0.0389，P<0.01。72h NC組、siRNA組的OD值分別為1.911±0.110、1.611±0.138，P<0.05。
　　4.敲除STIM1對胃癌細胞SGC-7901和BGC-823凋亡的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照48h后，應用流式細胞儀對胃癌細胞胃癌細胞 SGC-7901和 BGC-823凋亡進行檢測。SGC-7

32、901細胞 NC組 VS si STIM1組=4.753±0.15%VS6.533±0.153%，P<0.01。BGC-823細胞 NC組 vs si STIM1組=2.733±0.208%VS6.763±0.764%，P<0.01。
　　5.敲除STIM1對胃癌細胞SGC-7901和BGC-823遷移的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照48h后，應用Transwell遷移模型對胃癌細胞胃癌細胞SGC-7901和BGC-

33、823遷移進行檢測。實驗結(jié)果示SGC-7901細胞48h NC組遷移的細胞數(shù)為443.33±21.825，si STIM1組遷移的細胞數(shù)為133±15.716， P=0.000。BGC-823細胞 NC組遷移的細胞數(shù)為642.67±31.342，si STIM1組遷移的細胞數(shù)為254.33±17.502，P=0.000。
　　6.敲除STIM1對胃癌細胞SGC-7901和BGC-823侵襲的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性

34、對照48h后，應用Transwell侵襲模型對胃癌細胞SGC-7901和BGC-823侵襲進行檢測。實驗結(jié)果示SGC-7901細胞48h NC組侵襲出的細胞為431±19，siSTIM1組為94±11，P=0.000。BGC-823細胞 NC組侵襲出的細胞為259±18，siSTIM1為99±10。siSTIM1組與NC組相比，P=0.000。
　　7.敲除 STIM1對胃癌細胞 SGC-7901和 BGC-823的E-cadhe

35、rin、N-cadherin、Viminten表達的影響。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照24h后，應用 qRT-PCR檢測胃癌細胞 SGC-7901和 BGC-823中 STIM1、E-cadherin、N-cadherin、Viminten的mRNA的表達。實驗結(jié)果顯示SGC-7901和BGC-823細胞siSTIM1組中，在STIM1被敲除后，N-cadherin、Viminten較NC組明顯降低，P<0.01，E-cadh

36、erin卻明顯升高，P<0.05。在轉(zhuǎn)染STIM1-siRNA及陰性對照48h后，應用Western-blot檢測胃癌細胞SGC-7901和BGC-823中STIM1、上皮鈣黏附蛋白、神經(jīng)鈣黏附蛋白、波形蛋白的蛋白表達。實驗結(jié)果顯示 STIM1在敲除后， SGC-7901、BGC-823中N-cadherin、Viminten蛋白水平表達均顯著下降，P<0.01；而E-cadherin蛋白水平表達顯著升高，P<0.01。
　　小結(jié)

37、：
　　1.STIM1在SGC-7901、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS中過表達。
　　2.STIM1-siRNA能成功轉(zhuǎn)染 SGC-7901和 BGC-823細胞，能下調(diào)SGC-7901和BGC-823細胞中STIM1的表達水平。
　　3.下調(diào)STIM1表達能抑制SGC-7901和BGC-823細胞的增殖。
　　4.下調(diào)STIM1表達能促進SGC-7901和BGC-823細胞的凋亡。

38、>　　5.下調(diào)STIM1表達能抑制SGC-7901和BGC-823細胞的遷移與侵襲。
　　6.下調(diào)STIM1表達后SGC-7901和BGC-823細胞發(fā)生了EMT逆轉(zhuǎn)，即間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化。
　　第三部分：胃癌組織中STIM1的表達與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化關(guān)系及臨床意義
　　目的：探討基質(zhì)間質(zhì)分子1（stromal interaction molecule1，STIM1）在胃癌組織中的表達以及STIM1和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化之間關(guān)系。

39、　　方法：
　　1.選取河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院外三科在2009年6月至2011年10月手術(shù)切除的170例胃腺癌和35例癌旁組織標本，術(shù)前未接受放、化療，未同時合并其他腫瘤，運用免疫組化方法檢測胃癌和癌旁標本組織中STIM1、E-cadherin和β-cadherin表達。
　　2.采用SPSS19.0進行統(tǒng)計學處理，采用卡方檢驗（X2檢驗）進行數(shù)據(jù)分析。采用 Kaplan-Meier繪制生存曲線。采用二分類多因素 logist

40、ics回歸模型探討影響 STIM1陽性表達的因素。cox比例風險回歸回歸模型探討影響患者死亡的因素并分析其與臨床病理特點的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　1.STIM1主要表達在胃癌組織的胞漿，STIM1在胃癌組織中陽性表達率為43.5%（74/170），明顯高于癌旁組織（8.60%,3/35,χ2=15.12, P<0.001）。
　　2.胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性病人STIM1陽性表達率明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性病人(P<0.001

41、)。TNM分期I/II期胃癌組織中STIM1陽性表達率為33.5%（17/57），明顯低于III/IV(66.5%,57/113, P=0.01)。STIM1表達與性別、年齡、腫瘤分化程度、腫瘤位置、腫瘤大小不相關(guān)，P>0.05。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人STIM1陽性表達的唯一獨立危險因素。
　　3.使用Kaplan–Meier分析，我們發(fā)現(xiàn)STIM1表達陽性的胃癌病人總生存率明顯低于STIM1表達陰性的胃癌病人，P=0.043。多因

42、素分析提示患者生存率明顯相關(guān)的因素有STIM1陽性表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的TNM分期。cox比例風險回歸模型顯示 STIM1陽性表達和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人的獨立預后因素
　　4.E-cadherin和β-catenin異常表達在胃癌細胞的胞漿或胞核，胃癌組織中，E-cadherin和β-catenin異常表達率分別為61.8%(105/170)、52.4%(89/170)。在癌旁組織中，E-cadherin和β-catenin異常表

43、達率分別11.4%(4/35)和20.0%(7/35)。E-cadherin和β-catenin異常表達率在胃癌組織和癌旁組織中具有顯著差異，P<0.001。E-cadherin異常表達率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM高分期明顯相關(guān)，P<0.001，β-catenin異常表達率與腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期明顯相關(guān)，P<0.001，與其他臨床病理參數(shù)不相關(guān)，P>0.05。
　　5.STIM1陽性的胃癌組織中 E-cadherin陽性率為

44、78.4%(58/74)、β-catenin陽性率90.5%(67/74)。STIM1表達與E-cadherin(χ2=34.555，P<0.001，κ=0.447)和β-catenin(χ2=45.947，P<0.001，κ=0.486)異常表達顯著相關(guān)。E-cadherin異常表達的胃癌組織中β-cadherin異常表達率為79.8%，E-cadherin異常表達與β-cadherin異常表達顯著相關(guān)(P<0.001)；胃癌組織中S

45、TIM1表達與E-cadherin(P<0.001)和β-cadherin(P<0.001)異常表達顯著相關(guān)。
　　小結(jié)：
　　1.STIM1在胃癌組織中表達明顯高于癌旁組組。
　　2.胃癌組織中STIM1表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的TNM分期顯著相關(guān)。
　　3.胃癌組織中STIM1表達陽性的病人總生存率明顯低于表達陰性的胃癌病人。STIM1表達陽性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人的獨立預后因素。
　　4.胃癌組織中異常表

46、達的E-cadherin和β-cadherin顯著高于癌旁組織。
　　5.胃癌組織中STIM1表達與E-cadherin和β-cadherin異常表達顯著相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1.miR-185-5p在胃癌細胞株、胃癌組織中低表達。STIM1在胃癌細胞株、胃癌組織中過表達。胃癌組織中miR-185-5p表達量相對于癌旁組織顯著低表達，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM高分期相關(guān)。STIM1在胃癌組織中過表達，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、高的TN

47、M分期顯著相關(guān)。胃癌組織中 STIM1表達陽性的病人總生存率明顯低于表達陰性的胃癌病人。STIM1表達陽性和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌病人的獨立預后因素，miR-185-5p與STIM1表達量呈負性相關(guān)，miR-185-5p與STIM1可以成為胃癌轉(zhuǎn)移的預測因素。
　　2.miR-185-5p負性調(diào)控胃癌細胞的STIM1表達及SOCE振幅。
　　3.miR-185-5p抑制胃癌細胞的增殖、遷移、侵襲。SOCE抑制劑SKF96365能消

48、除miR-185-5p對胃癌細胞增殖、遷移、侵襲的影響。
　　4.敲除STIM1能抑制胃癌細胞的增殖、遷移、侵襲。
　　5.STIM1促進了胃癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化：胃癌組織中 STIM1表達與E-cadherin和β-cadherin異常表達顯著。敲除 STIM1，引起胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化逆轉(zhuǎn)，即間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化。
　　6.miR-185-5p-STIM1-SOCE通路調(diào)節(jié)胃癌細胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
　　7.miR-185-