大蒜新素二烯丙基三硫化物鍵合硅膠液相色譜固定相的制備與表征.pdf

1、利用中草藥有效成分的天然結(jié)構(gòu)和藥物功能，設(shè)計(jì)和開發(fā)新型色譜分離材料，并制備新型抗茵材料，進(jìn)行相關(guān)應(yīng)用基礎(chǔ)研究，對(duì)深層次開發(fā)利用我國豐富的中草藥資源具有重要意義和廣闊的應(yīng)用前景，同時(shí)也是色譜學(xué)與相關(guān)應(yīng)用學(xué)科交叉的前沿研究課題，顯示出重要的學(xué)術(shù)價(jià)值。本學(xué)位論文制備了具有抗菌功效的大蒜新素鍵合硅膠固定相，表征和評(píng)價(jià)了新固定相的高效液相色譜性能，通過各種溶質(zhì)和實(shí)際樣品較系統(tǒng)地探討了色譜保留機(jī)理，并對(duì)大蒜新素鍵合硅膠的生物活性進(jìn)行了研究，同時(shí)探討

2、了其抗菌機(jī)理。主要研究?jī)?nèi)容如下： 1．較全面地綜述了近年來高效液相色譜鍵合硅膠固定相的研究進(jìn)展，對(duì)傳統(tǒng)鍵合硅膠色譜固定相的改造設(shè)計(jì)和新型鍵合硅膠固定相的研究開發(fā)兩個(gè)方面進(jìn)行了評(píng)述，并就鍵合硅膠固定相的制備、色譜性能、保留機(jī)理及其在高效液相色譜中的應(yīng)用研究進(jìn)行重點(diǎn)評(píng)述。 2．采用固液相表面連續(xù)反應(yīng)法，在過氧化二異丙苯的引發(fā)下，偶聯(lián)劑γ-巰丙基三甲氧基硅烷鍵合硅膠(MPSP)與制備的大蒜新素二烯丙基三硫化物發(fā)生巰烯加成反應(yīng)，

3、首次制備了一種具有抗菌功效的新型直鏈色譜固定相-大蒜新素二烯丙基三硫化物鍵合固定相(DTSP)。對(duì)配體的選擇、制各路線的設(shè)計(jì)進(jìn)行了探討，同時(shí)對(duì)反應(yīng)進(jìn)行了一定的優(yōu)化，在較好的實(shí)驗(yàn)條件下制得MPSP和DTSP。并采用元素分析、紅外光譜、熱重分析和質(zhì)譜分析對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。結(jié)果表明，配體大蒜新素被成功地鍵合到球形硅膠表面，MPSP和DTSP鍵合量分別為1.47mmolg<'-1>和0.23mmolg<'-1>，并具有良好的熱穩(wěn)定性。

4、3．首先采用Kimata等提出的鍵合相綜合評(píng)價(jià)方法，表征DTSP的基本色譜性能。然后以苯的同系物、多環(huán)芳烴、取代芳烴位置異構(gòu)體、中性芳香化合物、酚類物質(zhì)、取代苯甲酸和芳香胺等化合物為溶質(zhì)探針，傳統(tǒng)ODS柱為參比，進(jìn)一步更系統(tǒng)地探討了新固定相對(duì)不同類型化合物的色譜分離機(jī)理和特點(diǎn)。結(jié)果表明：具有抗菌作用的大蒜新素鍵合相不僅有抗微生物污染的能力，更重要的是它能為不同結(jié)構(gòu)的溶質(zhì)提供疏水、氫鍵、π-π、n-π、電荷轉(zhuǎn)移和離子交換作用等，從而對(duì)酸性

5、、中性和堿性等多種類型化合物顯示較好的快速分離能力，并對(duì)極性取代芳烴位置異構(gòu)體有立體選擇性。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)新固定相對(duì)大黃和娃兒藤植物提取液有實(shí)際分離能力，對(duì)大蒜粉實(shí)際樣品中的含硫化合物具有特異性作用。 4．通過高效液相色譜法研究了核苷、嘌呤、嘧啶和水溶性維生素等極性化合物在DTSP上的色譜行為?？疾炝肆鲃?dòng)相的變化因素對(duì)溶質(zhì)保留行為的影響，例如：流動(dòng)相甲醇含量、pH值和離子強(qiáng)度。圖譜顯示DTSP對(duì)極性化合物核苷、嘌呤、嘧啶和水溶性維

6、生素有良好的分離選擇性。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的色譜數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，DTSP的色譜分離機(jī)理是疏水作用、氫鍵作用、n-π、π-π作用和偶極。偶極作用等，同時(shí)在一定程度上離子交換作用也改變色譜保留行為?？傊?，與ODS相比，DTSP具有的多種作用位點(diǎn)、可形成協(xié)同作用改善了對(duì)極性化合物分離選擇性，同時(shí)DTSP也具有良好的色譜重現(xiàn)性，可預(yù)見其對(duì)分離極性化合物具有廣闊的應(yīng)用前景。 5．將天然抗菌配體大蒜新素化學(xué)鍵合到硅膠表面制各抗菌材料有重要的意義和應(yīng)用前景

7、。實(shí)驗(yàn)制備了偶聯(lián)劑γ-巰基丙基鍵合無定型硅膠(MPS)和大蒜新素鍵合無定型硅膠(DTS)。采用元素分析、紅外光譜、熱重分析和質(zhì)譜分析進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，MPS和DTS的鍵合量分別為1.73 mmolg<'-1>和0.27 mmolg<'-1>。通過抑菌環(huán)試驗(yàn)考察了DTS對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、產(chǎn)氣桿菌和變形桿菌的抗菌活性，抑菌環(huán)分別為9.0，8.1，10.1，9.2，8.9 mm。實(shí)驗(yàn)同時(shí)采用攪拌涂布平板法考察了牛肉膏蛋白胨

8、基中DTS含量對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌抑菌效果的影響。結(jié)果表明，DTS對(duì)這5種菌均有良好的抑菌效果，消除了濃烈的大蒜氣味：同時(shí)保存了大蒜新素的抗菌活性。初步探討了該DTS的抗茵機(jī)理，為疏水性顆粒狀樣品的抗菌試驗(yàn)，提供了一種攪拌涂布平板法。 6．烯丙基硫化物由于弱極性不電離，首次利用Ag<'+>柱后誘導(dǎo)電離對(duì)大蒜粉劑中的含硫化合物進(jìn)行質(zhì)譜定性，并以大蒜新素為參比，對(duì)各種二烯丙基多硫化合物進(jìn)行定量測(cè)定。采用甲醇．水梯度洗脫，色譜

9、柱為Waters Symmetry C<,18>(3.9min×l50mm，5μm)柱，流動(dòng)相流速為0.5mLmin<'-1>，30min實(shí)現(xiàn)良好分離。將1mmolL<'-1> AgNO<,3>衍生試劑以5μLmin<'-1>流速注入柱后管路，毛細(xì)管電壓3Kv，正離子電離方式質(zhì)譜檢測(cè)。結(jié)果表明，二烯丙基多硫化物的色譜行為符合“硫數(shù)規(guī)律”(10gk'=0.4276d+0.0364n，r=0.9910)；利用該類化合物摩爾吸光系數(shù)與大蒜新素