斑馬魚zTWEAK和暗紋東方鲀gTRAIL的克隆表達(dá)、進(jìn)化分析、生物學(xué)功能研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 斑馬魚腫瘤壞死因子弱誘導(dǎo)凋亡因子TWEAK(簡(jiǎn)稱zTWEAK)基因的克隆、表達(dá)、組織分布以及生物信息學(xué)分析。
　　TWEAK是腫瘤壞死因子配體超家族成員，是一個(gè)多功能的細(xì)胞因子。為研究不同物種之間此基因進(jìn)化關(guān)系，本文運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄PCR的方法克隆了斑馬魚的TWEAK的cDNA，其中開放閱讀框由711個(gè)堿基對(duì)組成，編碼236個(gè)氨基酸。通過(guò)比對(duì)斑馬魚的TWEAK基因序列，顯示zTWEA

2、K基因與hTWEAK(人 TWEAK)基因序列的同源性是31.4％，與鼠TWEAK序列的同源性是30.8％，進(jìn)化樹分析還表明斑馬魚與河鲀魚的同源性是48.0％，而與綠河鲀的同源性是59.5％，與哺乳動(dòng)物的同源性從29.6％到32％之間?？寺TWEAK基因，并將其與SUMO基因融合后于大腸桿菌BL21中表達(dá)，融合蛋白大小是33KD，通過(guò)Ni-NTA純化，并經(jīng)SDS-PAGE和western檢測(cè)，成功表達(dá)并純化融合蛋白，為斑馬魚作為模式動(dòng)

3、物提供了有用的信息。
　　第二部分 暗紋東方鮑TRAIL基因的克隆、表達(dá)、組織分布及生物學(xué)功能的研究。
　　用反轉(zhuǎn)錄PCR方法克隆暗紋東方純的腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(簡(jiǎn)稱gTRAIL)的全長(zhǎng)cDNA，其開放閱讀框包含870堿基對(duì)，編碼的蛋白質(zhì)序列與其他的魚類具有高度的同源性。將TRAIL與SUMO基因融合表達(dá)是為增強(qiáng)其在大腸桿菌BL21中的可溶性，體外MTT檢測(cè)表明TRAIL融合蛋白劑量依賴性的誘導(dǎo)Jurkat和Hel