斑馬魚zTWEAK和暗紋東方鲀gTRAIL的克隆表達、進化分析、生物學功能研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 斑馬魚腫瘤壞死因子弱誘導凋亡因子TWEAK(簡稱zTWEAK)基因的克隆、表達、組織分布以及生物信息學分析。
　　TWEAK是腫瘤壞死因子配體超家族成員，是一個多功能的細胞因子。為研究不同物種之間此基因進化關系，本文運用反轉錄PCR的方法克隆了斑馬魚的TWEAK的cDNA，其中開放閱讀框由711個堿基對組成，編碼236個氨基酸。通過比對斑馬魚的TWEAK基因序列，顯示zTWEA

2、K基因與hTWEAK(人 TWEAK)基因序列的同源性是31.4％，與鼠TWEAK序列的同源性是30.8％，進化樹分析還表明斑馬魚與河鲀魚的同源性是48.0％，而與綠河鲀的同源性是59.5％，與哺乳動物的同源性從29.6％到32％之間?？寺TWEAK基因，并將其與SUMO基因融合后于大腸桿菌BL21中表達，融合蛋白大小是33KD，通過Ni-NTA純化，并經SDS-PAGE和western檢測，成功表達并純化融合蛋白，為斑馬魚作為模式動

3、物提供了有用的信息。
　　第二部分 暗紋東方鮑TRAIL基因的克隆、表達、組織分布及生物學功能的研究。
　　用反轉錄PCR方法克隆暗紋東方純的腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(簡稱gTRAIL)的全長cDNA，其開放閱讀框包含870堿基對，編碼的蛋白質序列與其他的魚類具有高度的同源性。將TRAIL與SUMO基因融合表達是為增強其在大腸桿菌BL21中的可溶性，體外MTT檢測表明TRAIL融合蛋白劑量依賴性的誘導Jurkat和Hel