斑馬魚(yú)Rictor基因的克隆、表達(dá)和功能研究.pdf

1、mTORC2隸屬于 PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路,尤其是 mTOR信號(hào)通路的過(guò)度活化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),是腫瘤治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)。近年來(lái)隨著臨床上這類(lèi)小分子抑制劑的出現(xiàn),使得人們對(duì)它的興趣越來(lái)越大,對(duì) Rictor和mTORC2相關(guān)的報(bào)道越來(lái)越多。Rictor是作為 mTORC2腳手架的一個(gè)蛋白出現(xiàn),共同和其他的五個(gè)蛋白維持著 mTORC2的穩(wěn)定。mTORC2在許多重要的生理學(xué)過(guò)程中扮演重要角色,包括:細(xì)胞生存、

2、代謝、增殖、細(xì)胞骨架的合成等,但是相對(duì)于 mTORC1來(lái)說(shuō), mTORC2有更多未知的部分需要我們?nèi)ヌ剿?比如說(shuō) mTORC2的上游信號(hào)通路有哪些,它們是如何激活 mTORC2的,Rictor是否維持 mTORC2的穩(wěn)定?在 mTORC2中扮演什么角色?目前這一部分尚屬空白,查閱相關(guān)文獻(xiàn)沒(méi)有確鑿證據(jù),這些都是很有趣的話題。
　　運(yùn)用斑馬魚(yú)模式生物研究 Rictor的基因功能,首先我們應(yīng)用生物信息學(xué)的方法,證明斑馬魚(yú) Rictor基

3、因在進(jìn)化上高度保守,為脊椎動(dòng)物保守基因,為其后續(xù)在造血系統(tǒng)和造血微環(huán)境方面的研究提供了理論支持和鋪墊。整胚胎原位雜交技術(shù)廣泛運(yùn)用于基因表達(dá)譜,是研究斑馬魚(yú)發(fā)育,探索相關(guān)基因的功能的重要手段。本研究根據(jù)斑馬魚(yú) rictor mRNA設(shè)計(jì)構(gòu)建合成反義 RNA探針,整胚胎原位雜交技術(shù)分析了rictor在斑馬魚(yú)早期發(fā)育過(guò)程中(時(shí)間和空間上)的表達(dá)情況,Zrictor在胚胎的單胞期就開(kāi)始表達(dá),24小時(shí)特異性的表達(dá)于脊索,48到72小時(shí)特異性的表達(dá)

4、與神經(jīng)管和肌節(jié)。通過(guò)反義嗎啉代寡核苷酸 MO(低表達(dá))抑制Zrictor后,結(jié)果發(fā)現(xiàn) mo注射組斑馬魚(yú)胚胎出現(xiàn)很少量的心包積液和身體彎曲(主要在尾部),并且在發(fā)育早期呈現(xiàn)一定的發(fā)育滯后。顯微注射前后斑馬魚(yú)時(shí)空表達(dá)的差異,在血液系統(tǒng)的marker和心臟 marker里面沒(méi)有出現(xiàn)明顯的變化,但是 Fli-1在節(jié)間血管有輕微變化,肌肉的表達(dá)(myod)有所減少;有心包積液的斑馬魚(yú)胚胎用o-staining檢測(cè)循環(huán)形成后斑馬魚(yú)的血紅蛋白的分布表