斑馬魚Rictor基因的克隆、表達和功能研究.pdf

1、mTORC2隸屬于 PTEN/PI3K/AKT/mTOR信號通路,尤其是 mTOR信號通路的過度活化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關,是腫瘤治療的一個重要靶點。近年來隨著臨床上這類小分子抑制劑的出現(xiàn),使得人們對它的興趣越來越大,對 Rictor和mTORC2相關的報道越來越多。Rictor是作為 mTORC2腳手架的一個蛋白出現(xiàn),共同和其他的五個蛋白維持著 mTORC2的穩(wěn)定。mTORC2在許多重要的生理學過程中扮演重要角色,包括:細胞生存、

2、代謝、增殖、細胞骨架的合成等,但是相對于 mTORC1來說, mTORC2有更多未知的部分需要我們去探索,比如說 mTORC2的上游信號通路有哪些,它們是如何激活 mTORC2的,Rictor是否維持 mTORC2的穩(wěn)定?在 mTORC2中扮演什么角色?目前這一部分尚屬空白,查閱相關文獻沒有確鑿證據(jù),這些都是很有趣的話題。
　　運用斑馬魚模式生物研究 Rictor的基因功能,首先我們應用生物信息學的方法,證明斑馬魚 Rictor基

3、因在進化上高度保守,為脊椎動物保守基因,為其后續(xù)在造血系統(tǒng)和造血微環(huán)境方面的研究提供了理論支持和鋪墊。整胚胎原位雜交技術廣泛運用于基因表達譜,是研究斑馬魚發(fā)育,探索相關基因的功能的重要手段。本研究根據(jù)斑馬魚 rictor mRNA設計構建合成反義 RNA探針,整胚胎原位雜交技術分析了rictor在斑馬魚早期發(fā)育過程中(時間和空間上)的表達情況,Zrictor在胚胎的單胞期就開始表達,24小時特異性的表達于脊索,48到72小時特異性的表達

4、與神經(jīng)管和肌節(jié)。通過反義嗎啉代寡核苷酸 MO(低表達)抑制Zrictor后,結果發(fā)現(xiàn) mo注射組斑馬魚胚胎出現(xiàn)很少量的心包積液和身體彎曲(主要在尾部),并且在發(fā)育早期呈現(xiàn)一定的發(fā)育滯后。顯微注射前后斑馬魚時空表達的差異,在血液系統(tǒng)的marker和心臟 marker里面沒有出現(xiàn)明顯的變化,但是 Fli-1在節(jié)間血管有輕微變化,肌肉的表達(myod)有所減少;有心包積液的斑馬魚胚胎用o-staining檢測循環(huán)形成后斑馬魚的血紅蛋白的分布表