斑馬魚Mylz2啟動子的克隆和轉(zhuǎn)熒光蛋白基因斑馬魚、唐魚的構(gòu)建.pdf

1、近年來，轉(zhuǎn)基因魚研究取得長足進步，外源蛋白在轉(zhuǎn)基因魚中的表達量得到顯著提高，初步突破了轉(zhuǎn)基因魚走向市場的技術(shù)障礙。轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因青()首先實現(xiàn)了商品化，轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因斑馬魚在美國獲準進入觀賞魚市場，向采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育觀賞魚新品種邁出了重要的一步。唐魚是我國特有的小型鯉科魚類，在觀賞魚界占有重要地位。為了探討開發(fā)具有較高觀賞價值的轉(zhuǎn)基因唐魚的可行性，本研究嘗試利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，分別將紅色和綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)入斑馬魚和唐魚受精卵，并

2、使其在肌肉組織特異性高效表達。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因唐魚在普通光下體色呈現(xiàn)鮮紅色，肉眼可見熒光，與野生型有明顯區(qū)別，在紫外光下則發(fā)出強熒光，觀賞價值得到明顯的提高，為利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)開發(fā)新的觀賞魚品種打下了基礎(chǔ)。1.斑馬魚肌球蛋白輕鏈2(mylz2)啟動子的克隆及熒光蛋白表達載體的構(gòu)建　　采用PCR(聚合酶鏈式反應)方法，從斑馬魚基因組DNA中分離得到了斑馬魚肌球蛋白輕鏈2啟動子基因。該啟動子為肌肉特異性啟動子，大小為1936bp

3、，包含了1個TATA框、4個MEF2結(jié)合位點和6個與bHLH轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合的E-框(CANNTG)?！　〔捎蔑@微注射方法，將線性化的綠色熒光蛋白表達載體(pEGFP-mylz2)和紅色熒光蛋白表達載體(pDsRed-mylz2)分別導入斑馬魚和唐魚受精卵中，獲得了轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因斑馬魚(出膜率為52.8％，觀察到熒光的胚胎數(shù)占注射存活胚胎總數(shù)的7.2％)、轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因斑馬魚(出膜率為47.0％，觀察到熒光的胚胎數(shù)占注射存活胚胎