斑馬魚(yú)脂肪酶家族基因的表達(dá)模式、功能與進(jìn)化研究.pdf

1、脂肪是生物體重要的儲(chǔ)能物質(zhì),在其分解之后得到的產(chǎn)物—脂肪酸又是生物體重要的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和活性物質(zhì),對(duì)生物體的正常生命活動(dòng)起重要作用。脂肪酶是一種能夠水解甘油三酯、磷脂等脂類(lèi)物質(zhì)的水溶性酶類(lèi),對(duì)于生物體脂類(lèi)物質(zhì)的代謝以及與脂代謝相關(guān)的機(jī)體重要生理調(diào)控起重要的作用。已發(fā)現(xiàn)的脂肪酶家族成員主要包括脂蛋白脂肪酶(LPL)、肝脂肪酶(LIPC)、胰脂肪酶(PL)、內(nèi)皮脂肪酶(EL)、絲氨酸磷脂酶(PLA1A)、H型脂肪酶(LH)、胰脂肪酶相關(guān)蛋白1(

2、PLRP1)和胰脂肪酶相關(guān)蛋白2(PLRP2)等。目前對(duì)脂肪酶家族成員的研究主要見(jiàn)于哺乳動(dòng)物中,而對(duì)魚(yú)類(lèi)中相關(guān)成員的存在及功能的研究還很欠缺。本文選取魚(yú)類(lèi)中的模式生物斑馬魚(yú)作為研究對(duì)象,系統(tǒng)地闡明了斑馬魚(yú)脂肪酶家族基因的表達(dá)模式及其功能,并對(duì)它們的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了分析。
　　本文首先運(yùn)用半定量RT-PCR和Real-time PCR技術(shù)對(duì)斑馬魚(yú)的脂蛋白脂肪酶(LPL)、肝脂肪酶(LIPC)、內(nèi)皮脂肪酶(EL)、絲氨酸磷脂酶(PL

3、A1A)和H型脂肪酶(LH)基因的組織表達(dá)進(jìn)行了分析。LPL基因在斑馬魚(yú)各個(gè)組織中呈泛表達(dá)的特點(diǎn),但在肝臟中的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他組織,這與哺乳動(dòng)物中的表達(dá)特征明顯不同;LIPC基因在肝組織特異表達(dá),與哺乳動(dòng)物中的表達(dá)特征完全一致;而EL、PLA1A和LH基因在各個(gè)組織中均廣泛表達(dá)?；诖?我們選取LPL和LIPC進(jìn)行深入研究。在胚胎發(fā)育時(shí)期,半定量RT-PCR和Real-time PCR檢測(cè)顯示,LPL基因隨著發(fā)育的進(jìn)行表達(dá)逐漸升高;胚

4、胎整體原位雜交結(jié)果顯示,在胚胎發(fā)育早期,LPL基因呈廣泛表達(dá),隨著發(fā)育的進(jìn)行,表達(dá)逐漸變化為特異表達(dá),主要分布于腮弓、側(cè)線(xiàn)神經(jīng)簇、胸鰭以及頭部區(qū)域。而LIPC基因在胚胎發(fā)育時(shí)期只在肝臟開(kāi)始發(fā)育時(shí)才開(kāi)始表達(dá)。另外,我們發(fā)現(xiàn)禁食可誘導(dǎo)LPL基因表達(dá)顯著升高,暗示LPL在攝食調(diào)控中發(fā)揮作用。
　　為了闡明脂肪酶基因的進(jìn)化,我們又選用文昌魚(yú)為研究對(duì)象,首先進(jìn)行了完善的系統(tǒng)進(jìn)化分析,然后成功的對(duì)文昌魚(yú)的一個(gè)類(lèi)脂肪酶基因進(jìn)行了克隆;我們又對(duì)該