rh-HGF聯(lián)合rh-VEGF165促內(nèi)皮細(xì)胞增殖及治療實(shí)驗(yàn)性大鼠下肢缺血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　構(gòu)建實(shí)驗(yàn)性大鼠下肢缺血模型及培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs），使用重組人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子165（ rh-VEGF165）和重組肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（rh-HGF）刺激，觀察刺激后體外HUVECs的增殖及體外管腔形成情況，體內(nèi)下肢毛細(xì)血管新生情況。
　　方法：
　　1.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：采用不同濃度的rh-VEGF165和rh-HGF（0 ng/ml、5 ng

2、/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、50 ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、120ng/ml）培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞，CCK-8（水溶性四唑鹽比色法）檢測(cè)HUVECs增殖情況。
　　2.研究rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：采用聯(lián)合不同濃度的rh-VEGF165和rh-HGF（0ng/ml+0ng/ml、5ng/ml+5ng/ml、10ng/ml+10ng/ml、30ng/ml+30

3、ng/ml、50ng/ml+50ng/ml、75ng/ml+75ng/ml、100ng/ml+100ng/ml、120ng/ml+120ng/ml）培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞，CCK-8檢測(cè)HUVECs增殖情況。
　　3.研究rh-VEGF165和rh-HGF刺激HUVECs的體外管腔形成情況：分別以對(duì)照組0.9％的生理鹽水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165聯(lián)

4、合100ng/ml rh-HGF培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞，相差顯微鏡觀察體外管腔形成情況。
　　4.研究rh-VEGF165和rh-HGF在體內(nèi)的作用情況：建立實(shí)驗(yàn)性大鼠下肢缺血模型，以對(duì)照組0.9%的生理鹽水、100ng/ml rh-VEGF165、100ng/ml rh-HGF和100ng/ml rh-VEGF165聯(lián)合100ng/ml rh-HGF作用于實(shí)驗(yàn)性大鼠，28天后取缺血下肢腓腸肌標(biāo)本，做H-E染色觀察肌組織核情況，免疫

5、組化觀察毛細(xì)血管新生情況。
　　結(jié)果：
　　1.rh-VEGF165刺激HUVECs的增殖情況：隨著rh-VEGF165的濃度升高， HUVECs的細(xì)胞光密度值（OD值）也隨之升高，與對(duì)照組相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），rh-VEGF165的濃度為10ng/ml時(shí)，OD值可達(dá)到最高，繼續(xù)增加rh-VEGF165的濃度，OD值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：隨著

6、rh-HGF的濃度升高，HUVECs的OD值也隨之升高，與對(duì)照組相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），rh-HGF的濃度為100ng/ml時(shí)，OD值可達(dá)到最高，繼續(xù)增加rh-HGF的濃度，OD值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　3.rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF刺激HUVECs的增殖情況：隨著不同聯(lián)合濃度改變，HUVECs的OD也隨之升高，與對(duì)照組相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）， rh-VEGF165聯(lián)合rh

7、-HGF的濃度為100ng/ml+100ng/ml時(shí)，OD值可達(dá)到最高，繼續(xù)增加rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF的濃度，OD值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　4.rh-VEGF165的濃度為100ng/ml、rh-HGF的濃度為100ng/ml、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF的濃度為100ng/ml+100ng/ml， rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF的OD值>rh-HGF的OD值>rh-VEGF165的OD值，

8、三者之間的OD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5.體外管腔實(shí)驗(yàn)結(jié)果：對(duì)照組無(wú)明顯毛細(xì)管腔樣結(jié)構(gòu)，實(shí)驗(yàn)組均可見明顯毛細(xì)管腔樣結(jié)構(gòu)，rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組最明顯。
　　6.H-E染色結(jié)果提示：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組與rh-HGF組間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），rh-VEGF165組、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組與對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），rh-VEGF165組、rh-VEG

9、F165聯(lián)合rh-HGF組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　7.免疫組化結(jié)果提示：體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組與rh-HGF組間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），rh-VEGF165組、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組與對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），rh-VEGF165組、rh-VEGF165聯(lián)合rh-HGF組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　rh-VEGF165聯(lián)合 rh-H