RAGE-NF-kB信號通路在低氧誘導3t3-L1脂肪細胞的胰島素抵抗中的作用.pdf

1、摘要II摘要背景及背景及目的：目的：糖尿病是一種因胰島素抵抗（insulinresistance，IR）或胰島素分泌不足導致的以高血糖為特征的代謝性疾病。阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(obstructivesleepapneahypopneasyndrome，OSAHS)是一種慢性間歇性缺氧性疾病，與糖尿病或胰島素抵抗存在密切關(guān)系。研究表明胰島素抵抗和2型糖尿病往往伴隨著慢性、低度、系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)。在缺氧態(tài)下，機體會啟動相應(yīng)的調(diào)節(jié)機制

2、其中缺氧誘導因子(HIF)起著重要的作用，它可以激活一系列炎癥因子導致炎性損害。晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(receptfadvancedglycationendproductsRAGE)屬于免疫球蛋白超家族成員之一的多配體受體，廣泛分布于各種細胞膜表面，主要通過激活NFκB介導慢性炎癥過程，參與多種慢性疾病的發(fā)生發(fā)展。因此，我們推測，低氧可能通過激活RAGENFκB信號通路導致脂肪細胞胰島素抵抗。本研究擬低氧干預(yù)3T3L1脂肪細胞，觀察低

3、氧環(huán)境下，脂肪細胞葡萄糖消耗及RAGE表達情況，然后利用小干擾RNA干擾RAGE表達，特異性抑制劑抑制NFκB活化，觀察低氧對脂肪細胞胰島素信號通路調(diào)節(jié)、葡萄糖利用率的影響，分析RAGENFκB信號通路在低氧致脂肪細胞胰島素抵抗過程中的作用機制。方法：方法：低氧干預(yù)（150μMCoCl2模擬低氧）分化成熟的脂肪細胞，時間梯度組分為5組：對照組（低氧0h組）、低氧6h組、低氧12h組、低氧24h組和低氧48h組。給予細胞上述處理后提取細胞

4、RNA及蛋白，采用熒光定量PCR檢測細胞RAGE和HIF1αmRNA的表達水平，采用WesternBlot法檢測細胞RAGE和HIF1α蛋白表達水平；同時收集細胞培養(yǎng)上清液，采用葡萄糖氧化酶過氧化物酶法檢測各組的葡萄糖消耗水平。選擇最適的低氧干預(yù)時間，利用siRNARAGE進一步反向驗證RAGE在低氧致脂肪細胞胰島素抵抗的作用。將實驗分組為4組：正常組、低氧組、低氧亂序?qū)φ誷iRNA組和低氧siRNARAGE組。采用WesternBlo