EGCG對(duì)cTnIR193H限制型心肌病小鼠cTnI表達(dá)的影響.pdf

1、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）源于茶多酚，具有多種生物活性。EGCG可以降低組蛋白去乙酰化酶（HDACs）的活性，從而調(diào)控基因的表達(dá)。本課題組前期對(duì)cTnI R193H限制型心肌病模型小鼠研究發(fā)現(xiàn)，正常 cTnI表達(dá)降低、而突變 cTnI異常表達(dá)是限制性心肌病（RCM）發(fā)病機(jī)制之一。研究還發(fā)現(xiàn)，EGCG干預(yù)R193H模型小鼠，可以降低模型小鼠心肌細(xì)胞對(duì)鈣的敏感性，改善其舒張功能。本課題組前期對(duì)老年小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，老年小鼠存在衰老性

2、舒張功能障礙并同時(shí)伴有cTnI表達(dá)降低，給予EGCG可明顯升高老年小鼠cTnI的表達(dá)，改善其衰老性舒張功能障礙。為此提出科學(xué)假設(shè)：EGCG還可能通過(guò)上調(diào)R193H小鼠正常cTnI的表達(dá)，參與改善舒張功能障礙。
　　目的：
　　本實(shí)驗(yàn)利用EGCG對(duì)cTnI R193H模型小鼠進(jìn)行3個(gè)月干預(yù)，以期探尋EGCG升高模型小鼠心臟正常cTnI的表達(dá)量，及其組蛋白乙酰化的調(diào)控機(jī)理。
　　方法：
　　選擇8周齡的健康SPF級(jí)C

3、57BL/6小鼠和cTnI R193H雄性小鼠各30只，兩種小鼠均分別分成EGCG干預(yù)組、DMSO干預(yù)組以及未干預(yù)組。EGCG干預(yù)采用腹腔注射溶于DMSO的EGCG，按照各個(gè)小鼠體重，每1kg體重給予EGCG50mg，DMSO干預(yù)采用腹腔注射與EGCG干預(yù)組溶劑容積一致的 DMSO，未干預(yù)組僅進(jìn)行腹腔注射行為，但不注射。每周干預(yù)5天，干預(yù)3個(gè)月后收集各組小鼠心臟組織。分別用Western blot、RT-PCR、ChIP-Q-PCR檢測(cè)

4、 cTnI的表達(dá)量；cTnI、GATA4及HDAC1的 mRNA表達(dá)水平；cTnI基因啟動(dòng)子區(qū)HDAC1、GATA4的結(jié)合水平及組蛋白 H3K9乙?；健?br>　　結(jié)果：
　　R193H小鼠心臟EGCG干預(yù)組與DMSO干預(yù)組和未干預(yù)組比較結(jié)果顯示：1. R193H小鼠EGCG干預(yù)組正常cTnI的表達(dá)量在mRNA及蛋白水平均升高（P＜0.05），而正常的野生型C57小鼠則無(wú)此變化。2. R193H小鼠 EGCG干預(yù)組 GATA4

5、的mRNA表達(dá)水平升高，HDAC1的mRNA表達(dá)水平降低（P＜0.05）。3. R193H小鼠EGCG干預(yù)組組蛋白H3K9乙酰化水平升高，cTnI啟動(dòng)子區(qū)域HDAC1結(jié)合水平降低，GATA4的結(jié)合水平升高（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　EGCG可通過(guò)抑制HDAC1的表達(dá)及HDAC1在cTnI啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合，促進(jìn)組蛋白H3K9的乙?；⑿呐K核心轉(zhuǎn)錄因子GATA4的表達(dá)及 GATA4在 cTnI啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合，上調(diào)限制型