益氣活血方藥對(duì)mmLDL誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞“Toll樣受體4-脾酪氨酸激酶”途徑的干預(yù)作用.pdf

1、研究背景：
　　益氣活血方寧心痛顆粒是治療冠心病不穩(wěn)定型心絞痛的院內(nèi)中藥自制制劑，臨床療效確切。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)亦證明，其可抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)血脂、穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊。而其具體的抗動(dòng)脈粥樣硬化的分子生物學(xué)機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。
　　目的：
　　觀察益氣活血方寧心痛顆粒及其組方中君藥黃芪、臣藥川芎主要活性成分（黃芪多糖、藁本內(nèi)酯）對(duì)輕度氧化修飾低密度脂蛋白誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞“Toll樣受體4-脾酪氨酸激酶

2、”途徑的干預(yù)作用，探討益氣活血方藥穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化易損斑塊、抑制動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的分子機(jī)制。
　　方法：
　　將THP-1源性巨噬細(xì)胞分為空白組、模型組、寧心痛顆粒含藥血清組及有效組分組（其中黃芪多糖與藁本內(nèi)酯設(shè)高、中、低劑量組，并設(shè)空白血清組與含藥血清組相比較）。采用輕度氧化修飾低密度脂蛋白（minimally modified low density lipoproteir/minimallyoxidized low d

3、ensity lipoprotein，mmLDL）干預(yù)THP-1源性巨噬細(xì)胞，免疫印跡法檢測(cè)脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase，Syk)、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（extracellular regulatedprotein kinases，Erk1/2）、樁蛋白(Paxillin)磷酸化水平隨時(shí)間變化情況;以及寧心痛顆粒含藥血清及有效組分對(duì)mmLDL干預(yù)的THP-1源性巨噬細(xì)胞Syk、Erk、Paxillin蛋白磷酸

4、化水平的影響;采用免疫沉淀聯(lián)合免疫印跡法檢測(cè)mmLDL干預(yù)的THP-1源性巨噬細(xì)胞Toll樣受體4(Toll like receptor4，TLR4)蛋白磷酸化水平隨時(shí)間變化情況，以及寧心痛顆粒含藥血清及有效組分對(duì)mmLDL干預(yù)的THP-1源性巨噬細(xì)胞TLR4蛋白磷酸化水平的影響;采用中性紅吞噬實(shí)驗(yàn)檢測(cè)寧心痛顆粒含藥血清及有效組分對(duì)mmLDL干預(yù)的THP-1源性巨噬細(xì)胞吞噬小分子物質(zhì)功能的影響。采用激光共聚焦方法檢測(cè)寧心痛顆粒含藥血清及

5、有效組分對(duì)mmLDL干預(yù)的THP-1源性巨噬細(xì)胞細(xì)胞骨架的影響。用SyksiRNA抑制THP-1源性巨噬細(xì)胞Syk的表達(dá)后，再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.寧心痛顆粒含藥血清可抑制由mmLDL引發(fā)的THP-1源性巨噬細(xì)胞TLR4、Syk、ERK、Paxillin蛋白磷酸化表達(dá)增高、吞噬小分子物質(zhì)功能增強(qiáng)、細(xì)胞骨架改變。
　　2.黃芪多糖可抑制由mmLD引發(fā)的THP-1源性巨噬細(xì)胞TLR4、Syk、ERK、Paxi

6、llin蛋白磷酸化表達(dá)增高、吞噬小分子物質(zhì)功能增強(qiáng)、細(xì)胞骨架改變。以黃芪多糖高劑量組的效果最為明顯。
　　3.藁本內(nèi)酯可抑制由mmLD引發(fā)的THP-1源性巨噬細(xì)胞TLR4、Syk、ERK、Paxillin蛋白磷酸化表達(dá)增高、吞噬小分子物質(zhì)功能增強(qiáng)、細(xì)胞骨架改變。以藁本內(nèi)酯高劑量組的效果最為明顯。
　　4.寧心痛顆粒含藥血清的上述作用強(qiáng)于黃芪多糖、藁本內(nèi)酯以及黃芪多糖聯(lián)合藁本內(nèi)酯組。
　　5.采用Syk siRNA對(duì)以上