參苓白術(shù)散對(duì)脾虛濕困型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織IL-4、IL-1β及p38MAPK基因蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究參苓白術(shù)散對(duì)脾虛濕困型潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠 p38MAPK信號(hào)通路p38MAPK及細(xì)胞因子IL-1β、IL-4基因及蛋白表達(dá)的干預(yù)作用，從基因及蛋白角度探討參苓白術(shù)散治療脾虛濕困型UC的可能作用機(jī)制。
　　方法：60只健康成年SPF級(jí)Wistar大鼠(體重180±20g)，按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為空白組與造模組。造模組實(shí)驗(yàn)大鼠用復(fù)合因素法復(fù)制脾虛濕困型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型，并給予相應(yīng)治療：①造模組實(shí)驗(yàn)大鼠空腹灌服精煉豬油2

2、mL/只·d，隔日1次；②每日使空白組之外的大鼠站立于2cm深的水中8h；③大鼠飼養(yǎng)采取饑、飽失常法(隔日禁食不禁水法)，并給予充足的飲水，連續(xù)造模21天；④將造模組實(shí)驗(yàn)大鼠按體重編號(hào)，隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組、參苓白術(shù)散高、中、低劑量組和SASP(柳氮磺胺吡啶)組。實(shí)驗(yàn)大鼠分籠飼養(yǎng)，雌雄各半，每組各10只；⑤空白組及模型組實(shí)驗(yàn)大鼠給予2mL/只·d蒸餾水灌胃治療；⑥參苓白術(shù)散各治療組分別給予高、中、低劑量的參苓白術(shù)散濃煎藥液灌胃治療(劑

3、量分別為24、12、6g·kg-1·d-1)；⑦西藥組灌服SASP片劑水溶液(0.2g·Kg-1·d-1)，每日一次，共計(jì)21天。
　　取材及檢測(cè)：各組大鼠于最后一次治療后禁食不進(jìn)水24小時(shí)，用5％水合氯醛0.3mL/100g麻醉后脫頸處死實(shí)驗(yàn)大鼠。
　　1股動(dòng)脈取血，室溫靜置30min，置于離心管中離心5min(3000rm/min)，取上層血清于無(wú)菌的凍存管內(nèi)-80℃冰箱保存，用于后續(xù)ELISA檢測(cè)。
　　2截取病

4、變部位結(jié)腸組織，并用生理鹽水反復(fù)沖洗干凈，記錄其結(jié)腸黏膜充血、壞死、潰瘍等。
　　3取病變部位2~3厘米的結(jié)腸組織，以4%多聚甲醛固定，HE法染色。并記錄各組大鼠結(jié)腸組織的病理變化情況，其他結(jié)腸組織置于無(wú)酶凍存管中-80℃冰箱保存以備用于以后的RT-PCR及Western-blot檢測(cè)使用。
　　結(jié)果：1與空白組相比較，模型組大鼠的結(jié)腸黏膜存在不同程度的充血、水腫、糜爛及潰瘍等病變，組間差異顯著(P<0.01)，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義；鏡下：模型組大鼠結(jié)腸黏膜均伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肉芽、纖維性增生。藥物治療后參苓白術(shù)散組及SASP組大鼠結(jié)腸組織的局部炎癥、壞死、肉芽及纖維增生等病變情況不同程度減輕。結(jié)腸組織病理?yè)p傷及肉眼觀察評(píng)分低于模型組大鼠，組間存在顯著差異(P<0.01)，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2與空白組比較，模型組大鼠血清及結(jié)腸組織p38MAPK、IL-1β含量升高，IL-4含量顯著降低、組間差異顯著(P<0.01)。參苓白術(shù)散中、高劑量組p

6、38MAPK、IL-1β含量表達(dá)明顯降低，IL-4的含量顯著升高，組間差異顯著(P<0.01)。柳氮磺胺吡啶組與參苓白術(shù)散高劑量組相比較，二者間p38MAPK、IL-1β、IL-4的含量表達(dá)無(wú)顯差異(P>0.05)，結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3 p38MAPK、IL-1Β、IL-4的基因表達(dá)水平比較：與空白組相比，模型組大鼠的p38MAPK、IL-1β的含量顯著升高，IL-4的含量顯著降低，組間差異顯著(P<0.01)。各參苓白術(shù)散

7、治療組結(jié)腸組織中的p38MAPK、IL-1β基因表達(dá)不同水平下降，以中、高劑量下降最明顯，IL-4的基因表達(dá)量明顯升高，組間差異顯著(P<0.01或P<0.05)。參苓白術(shù)散高劑量組與西藥組比較，組間差異不明顯(P>0.05)。
　　4 p38MAPK蛋白表達(dá)水平比較：與空白組相比較，模型組p38MAPK蛋白表達(dá)水平明顯升高，組間差異顯著(P<0.01)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。各治療組大鼠結(jié)腸組織內(nèi)的p38MAPK的蛋白含量均有不同程度的

8、降低。模型組與高劑量比較，組間存在顯著差異(P<0.01)。各參苓白術(shù)散治療組結(jié)腸組織p38MAPK蛋白表達(dá)水平存在不同程度下降，以中、高劑量組最明顯，組間差異顯著(P<0.01或P<0.05)。參苓白術(shù)散高劑量組與西藥組比較，組間差異不明顯(P>0.05)。
　　結(jié)論：1參苓白術(shù)散能夠干預(yù)UC大鼠結(jié)腸組織及血清內(nèi)的IL-1β、IL-4、p38MAPK的含量水平，具有降低炎細(xì)胞浸潤(rùn)、減輕局部炎癥反應(yīng)、促進(jìn)組織修復(fù)等作用。光鏡下觀察

9、顯示參苓白術(shù)散中、高劑量治療組結(jié)腸黏膜的組織細(xì)胞形態(tài)較接近正常細(xì)胞形態(tài)，表明參苓白術(shù)散有助于恢復(fù)結(jié)腸黏膜分泌及自我保護(hù)功能。
　　2脾虛濕困型潰瘍性結(jié)腸炎模型大鼠血清及其結(jié)腸組織內(nèi)p38MAPK、IL-1β、IL-4蛋白含量及基因表達(dá)水平可以反映模型大鼠的病變輕重程度，具有一定的監(jiān)測(cè)意義。
　　3參苓白術(shù)散的治療作用可能與下調(diào)UC模型大鼠結(jié)腸黏膜組織內(nèi)的IL-1β蛋白含量及基因表達(dá)水平，上調(diào)IL-4蛋白含量及基因表達(dá)水平，進(jìn)