Apelin-13對離體大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響及其對L-型鈣通道作用機制的研究.pdf

1、背景：急性心肌梗死是臨床上常見且嚴重危害人類健康的心血管疾病之一。隨著溶栓療法、經(jīng)皮冠狀動脈內(nèi)支架成形術等再灌注療法的推廣應用，缺血的心肌組織可及時得到再灌注治療。多數(shù)情況下，再灌注后可減輕組織損傷，但同時也可誘發(fā)心肌缺血再灌注損傷，如梗死面積增加、心功能降低以及再灌注性心律失常，這些再灌注損傷使再灌注治療的獲益大打折扣。因此，我們一直致力于尋找可降低再灌注損傷的藥物。Apelin作為血管緊張素受體相關蛋白（angiotensin re

2、ceptor-like protein J，APJ）的一個內(nèi)源性配體，是一種重要的生理調(diào)節(jié)肽。APJ是一種G蛋白耦聯(lián)受體，其結構與血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)的I型受體(ATl)非常相似，但并不與 AngⅡ結合。既往研究表明，Apelin/APJ系統(tǒng)在高血壓、心力衰竭、動脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生發(fā)展中都有一定的作用。而在心肌缺血再灌注方面，Apelin同樣發(fā)揮著一定的保護作用，但尚未見 Apelin對缺血/再灌注所致異常鈣電流作用的報道。

3、r>　　目的：1.探究Apelin-13對離體Wistar大鼠心臟缺血再灌注的影響，并與經(jīng)典后處理組進行對比。2.探究Apelin-13對急性分離大鼠心室肌細胞缺血再灌注時L-型鈣通道電流（ICa，L）改變的影響。
　　方法：1.組織水平缺血再灌注：健康雄性Wistar大鼠(260-300g)55只隨機分為5組：正常組（N組）、Apelin-13+正常組（A組）、缺血再灌注組（I-R組）、Apelin-13+缺血再灌注組（A/I-

4、R組）及經(jīng)典后處理組（I-Post組）(各組 n=11)， N組持續(xù)正常 KH液灌流150min，灌流期間不進行任何處理；A組給予含Apelin-13（500nmol/L）正常KH灌流液持續(xù)灌注150min；I-R組正常KH液穩(wěn)定灌流30min后，結扎前降支30min，繼以正常KH液再灌注90min；A/I-R組正常KH液穩(wěn)定灌流30min后，結扎前降支30min，給予含Apelin-13（500nmol/L）正常KH液再灌注20min

5、，繼而以正常KH液灌流70min；I-Post組正常KH液穩(wěn)定灌流30min后，結扎前降支30min，再灌注前行經(jīng)典后處理（30s再通30s缺血，共3次循環(huán)），繼以正常KH液再灌注90min。記錄分析左心室發(fā)展壓（left ventricular developed pressure，LVDP）、再灌注性心律失常（reperfusion arrthymia， RA）、心肌梗死面積、L型鈣通道蛋白α1C亞單位表達水平。2.細胞水平缺血再灌

6、注：雄性Wistar大鼠（260-300 g），肝素化及麻醉完全后固定于手術臺，開胸取心，懸掛于Langendorff灌流系統(tǒng)下，利用含膠原酶Ⅱ的無鈣臺氏液對離體大鼠心臟進行逆向灌流，待心臟顏色變淺、體積增大后剪取左心室部分，剪碎吹打使之分離成為單個心室肌細胞，利用膜片鉗記錄心室肌細胞的 ICa，L。全細胞膜片鉗技術細胞水平分正常組( N組)、缺血再灌注組( I-R組)和Apelin-13+缺血再灌注組(A/I-R組)(各組 n=8)，

7、N組持續(xù)正常ICa，L電極外液灌流，待電極內(nèi)液與細胞內(nèi)液交換充分后，進行連續(xù)膜電流記錄，此為正常細胞鈣電流;I-R組連續(xù)記錄正常ICa，L2min后用模擬缺血ICa，L電極外液沖洗替換原浴槽中的正常外液，連續(xù)記錄電流，此為缺血后鈣電流。缺血15 min后再以正常ICa，L電極外液或含有Apelin-13的ICa，L電極外液代替缺血外液，穩(wěn)定后記錄即為I/R組或A/I-R組鈣電流。分別統(tǒng)計分析每組數(shù)據(jù)，比較標準化峰電流、半激活電壓（V1/

8、2）、激活曲線斜率（K）等指標。
　　結果：1.對 LVDP的影響：與 N組相比，給予 Apelin-13后（即 A組）LVDP明顯增高（P＜0.05），而進行缺血再灌注處理后LVDP均持續(xù)下降，但Apelin-13及后處理均可減緩其降低，二者對 LVDP的影響差異無統(tǒng)計學意義。2.對 RA的影響：A/I-R組較 I-R組 RA評分降低（P＜0.005），A/I-R組與 I-Post組間RA評分差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.005）3

9、.對心肌梗死面積的影響：A/I-R組心肌梗死面積較I-R組減?。≒＜0.05），A/I-R組與I-Post組間心肌梗死面積差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）4.組間心肌鈣通道蛋白α1C亞單位表達無差異。5.對ICa，L的影響：與N組相比， I-R組和A/I-R組均使ICa，L標準化峰電流增大，但A/I-R組增大趨勢延緩。缺血后 ICa，L標準化峰電流從0.93±0.26增大到1.38±0.14(P＜0.01)，再灌注后標準化峰電流從0.7

10、1±0.10增大到1.29±0.15(P＜0.01)，Apelin-13可使再灌注損傷模型增大的ICa，L峰值恢復到1.08±0.12(P＜0.01)；與N組相比，I-R使鈣激活曲線左移，V1/2由-3.73±5.51左移至-14.62±3.88(P＜0.01)，Apelin-13可使左移曲線的V1/2恢復至-9.58±3.28(P＜0.05)；不同組別間K值變化無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。
　　結論：缺血再灌注同時予Apeli