不同處理方法對大鼠移植心臟缺血再灌注損傷的作用研究.pdf

1、第一部分：
　　 目的：建立一種穩(wěn)定可行的大鼠腹腔同種異體異位心臟移植模型。
　　 方法：選用40只SD大鼠作為供體和受體，隨機(jī)分為A、B兩組，在Ono創(chuàng)建的大鼠腹腔異位心臟移植模型的基礎(chǔ)上，對麻醉方法、供心摘取、受體準(zhǔn)備、吻合方法等進(jìn)行了部分改進(jìn)，術(shù)后統(tǒng)計(jì)手術(shù)時(shí)間及手術(shù)成功率。
　　 結(jié)果：正式實(shí)驗(yàn)20例存活14例，存活率70％。術(shù)中吻合口出血致死1例；術(shù)中移植心臟復(fù)跳后停跳1例；術(shù)后24h死亡4例，1例解剖發(fā)

2、現(xiàn)腸管變硬變黑，其余3例均有供心主肺動(dòng)脈與受體下腔靜脈吻合口內(nèi)血栓形成。供心摘取時(shí)間(6±2)min，供心主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈吻合時(shí)間(10±2)min，供心肺動(dòng)脈與受體下腔靜脈吻合時(shí)間(14±3)min，供心總?cè)毖獣r(shí)間(30±5)min，手術(shù)總時(shí)間(50±5)min。
　　 結(jié)論：對經(jīng)典的Ono大鼠腹腔異位心臟移植模型的操作方法進(jìn)行部分改進(jìn)后，降低了手術(shù)難度，縮短了手術(shù)時(shí)間，供體心臟保護(hù)好，手術(shù)成功率高。
　　 第二部

3、分：
　　 目的：觀察原花青素(Proanthocyanidin，PC)預(yù)處理和后處理對大鼠腹部異位移植心臟細(xì)胞凋亡以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)的影響并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：采用改良的Ono術(shù)式進(jìn)行大鼠同種腹腔異位心臟移植，制備缺血再灌注損傷模型，心肌缺血30min和再灌注60min。48只成年SD大鼠，按完全隨機(jī)法分為4組，每組12只(其中供體6只，受體6只)，分別為供體原花青素

4、預(yù)處理組(D組，n=6)，受體原花青素后處理組(R組，n=6)，供受體原花青素處理組(D+R組，n=6)，模型對照組(C組，n=6)。原花青素處理量根據(jù)大鼠質(zhì)量計(jì)算出原花青素用量(100mg/kg)[1，2]，并用生理鹽水稀釋至2ml灌胃，每日一次，共兩周；模型對照組供受體在同一時(shí)間用生理鹽水2ml灌胃，每日一次，共兩周。再灌注60min后切取供心。測定心肌組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(

5、MDA)含量。測定心肌組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax以及半胱氨酸天冬氨酸酶Caspase-3的表達(dá)水平。TUNEL法測細(xì)胞凋亡，光鏡觀察心肌組織結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果：與模型對照組比較，各原花青素處理組心肌組織中MDA含量降低，心肌組織中SOD、GSH-Px活性增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Bcl-2的表達(dá)升高，Caspase-3的表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較，各原花青素處理組大鼠

6、的心肌細(xì)胞無明顯凋亡，心肌組織損傷程度輕微。
　　 結(jié)論：原花青素對大鼠腹部異位移植心臟心肌缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，與其抗氧化應(yīng)激，抑制心肌細(xì)胞凋亡的線粒體途徑等因素有關(guān)。
　　 第三部分：
　　 目的：研究不同臟器不同參數(shù)的遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理方法對大鼠腹部異位移植心臟的保護(hù)作用并探討其機(jī)制。
　　 方法：60只SD大鼠按完全隨機(jī)法分成5組，每組12只(供體6只，受體6只)，依照對供體心臟不同的預(yù)處理方式

7、，分別列為單純移植組(C組)、腎動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理1組(R1組)、腎動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理2組(R2組)、腸系膜上動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理1組(M1組)、腸系膜上動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理2組(M2組)。通過改良的Ono手術(shù)方式建立大鼠腹部異位心臟移植模型，再灌注60min后切取供心。測定心肌組織中SOD、GSH-Px活性以及MDA含量，測定心肌組織中腫瘤壞死因子(TNF)-α和腫瘤壞死因子受體1(TNFR1)含量。TUNEL法測細(xì)胞凋亡，光鏡觀察心肌組

8、織結(jié)構(gòu)變化。
　　 結(jié)果：與C組R1組比較，R2組M1組M2組大鼠心肌組織中的MDA含量降低，SOD活性升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，R2組M1組M2組各組間無明顯差異：與C組R1組比較，R2組M1組M2組大鼠心肌組織中的TNF-α和TNFR1水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，R2組M1組M2組各組間無明顯差異。C組和R1組心肌細(xì)胞凋亡顯著，R2、M1和M2組未見明顯心肌細(xì)胞凋亡；光鏡下見C組和R1組心肌細(xì)胞

9、腫脹，間質(zhì)水腫，以淋巴細(xì)胞為主的大量炎性細(xì)胞浸潤；R2、M1和M2組心肌細(xì)胞形態(tài)基本正常。
　　 結(jié)論：腎動(dòng)脈遠(yuǎn)程預(yù)處理與腸系膜遠(yuǎn)程預(yù)處理均可對移植心臟缺血再灌注損傷提供保護(hù)作用，其作用機(jī)理與遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理抑制心肌細(xì)胞凋亡的死亡受體途徑有關(guān)。兩者缺血預(yù)處理產(chǎn)生遠(yuǎn)程保護(hù)作用所需的刺激強(qiáng)度閾值、持續(xù)時(shí)間以及刺激的循環(huán)次數(shù)等參數(shù)均不相同。
　　 第四部分：
　　 目的：觀察原花青素(Proanthocyanidin，P

10、C)預(yù)處理和后處理對大鼠腹部異位移植心臟細(xì)胞凋亡以及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表達(dá)的影響并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　 法：采用改良的Ono術(shù)式進(jìn)行大鼠同種腹腔異位心臟移植，制備缺血再灌注損傷模型，心肌缺血30min和再灌注60min。36只成年SD大鼠，按完全隨機(jī)法分為3組，每組12只(其中供體6只，受體6只)，分別為原花青素預(yù)處理組(PC組，n=6)，腸系膜上動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理組(M組，n=6)，模型對照

11、組(C組，n=6)。原花青素預(yù)處理組根據(jù)大鼠質(zhì)量計(jì)算出原花青素用量(100mg/kg)，并用生理鹽水稀釋至2ml灌胃，每日一次，共兩周；模型對照組供受體在同一時(shí)間用生理鹽水2ml灌胃，每日一次，共兩周。心臟移植成功后觀察供心復(fù)跳所需的時(shí)間，心律失常的發(fā)生率及持續(xù)時(shí)間。再灌注60min后切取供心，測定心肌組織SOD、GHS-Px以及MDA含量以及心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ，cTnI)和肌酸激酶同工酶MB(creat

12、ine kinase MB，CK-MB)。TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：與模型對照組比較，原花青素預(yù)處理組和腸系膜上動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理組心肌組織中MDA含量降低，SOD和GSH-Px活性增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，心肌cTnI、CK-MB活性均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型對照組比較，原花青素預(yù)處理組及腸系膜上動(dòng)脈遠(yuǎn)程缺血預(yù)處理組大鼠的心肌細(xì)胞無明顯凋亡。
　　 結(jié)論：原花青素預(yù)處理