雷公藤多苷干預(yù)舒尼替尼引起的小鼠腎足細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在通過體外實(shí)驗(yàn)研究雷公藤多苷（TWP）干預(yù)抗血管生成藥物舒尼替尼對小鼠腎足細(xì)胞的影響并探討其可能的機(jī)制，為進(jìn)一步動物實(shí)驗(yàn)及臨床藥物研究提供理論基礎(chǔ)及數(shù)據(jù)支持。
　　方法：
　　（1）體外培養(yǎng)小鼠腎足細(xì)胞，采用MTT法檢測舒尼替尼單藥在不同濃度和不同時間下對小鼠腎足細(xì)胞的增殖抑制作用，以及雷公藤多苷干預(yù)時對小鼠腎足細(xì)胞增殖抑制率的影響。（2）采用流式細(xì)胞術(shù)Annexin-V APC/7-AAD雙染法檢

2、測不同分組給藥作用48h后小鼠腎足細(xì)胞的凋亡情況；（3）通過Western blot法檢測不同分組藥物作用48h后小鼠腎足細(xì)胞裂孔膜相關(guān)蛋白Nephrin，CD2AP的表達(dá)情況；（4）采用免疫熒光法觀察不同藥物分組足細(xì)胞相關(guān)蛋白Nephrin，CD2AP表達(dá)及分布情況。
　　結(jié)果：
　?。?）不同濃度舒尼替尼作用24，48，72h后，小鼠腎足細(xì)胞增殖抑制率隨著藥物濃度及作用時間的增加而增高，呈現(xiàn)濃度依賴性和時間依賴性，TWP

3、+舒尼替尼組與舒尼替尼單藥組相比48h增殖抑制率降低，而24，72h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2）舒尼替尼組凋亡率高于對照組，且凋亡率隨濃度增加而增高，TWP+舒尼替尼組凋亡率低于舒尼替尼單藥組。（3）不同分組藥物作用48h后足細(xì)胞裂孔膜相關(guān)蛋白Nephrin，CD2AP表達(dá)量，舒尼替尼組較對照組降低，TWP+舒尼替尼組較舒尼替尼單藥組增高。(4)舒尼替尼組小鼠腎足細(xì)胞蛋白Nephrin，CD2AP表達(dá)較對照組降低，且舒尼替尼組 Nephri

4、n蛋白分布面積縮小，主要分布在細(xì)胞核周邊，呈現(xiàn)細(xì)小顆粒狀，而對照組為連續(xù)均勻分布；TWP+舒尼替尼組蛋白Nephrin，CD2AP表達(dá)較舒尼替尼組增高。
　　結(jié)論：
　?。?）在體外實(shí)驗(yàn)中，舒尼替尼對小鼠腎足細(xì)胞具有增殖抑制作用，并可誘導(dǎo)小鼠腎足細(xì)胞凋亡；雷公藤多苷干預(yù)時可保護(hù)小鼠腎足細(xì)胞，降低舒尼替尼導(dǎo)致的小鼠腎足細(xì)胞增殖抑制率和凋亡。（2）在體外實(shí)驗(yàn)中，舒尼替尼可下調(diào)足細(xì)胞裂孔膜相關(guān)蛋白 Nephrin，CD2AP的表達(dá)