清熱止血方、雷公藤多苷通過干預腎小球系膜細胞、足細胞軸中 TNF-α、podocalyxin治療HSPN蛋白尿體外研究.pdf

1、　　【目的】觀察各組藥物對紫癜性腎炎系膜細胞及足細胞損傷模型podocalyxin、TNF-α 表達和分泌的影響,進而了解清熱止血方、雷公藤多苷在 HSPN 治療中快速降蛋白尿的療效機制。
　　【方法】?通過親和層析柱和分子篩法純化血尿伴蛋白尿型 HSPN 患兒和健康對照者血清 m IgAl,將其熱聚合后,作用于體外培養(yǎng)系膜細胞,觀察細胞形態(tài)變化和增殖情況；檢測 TNF-α 分泌情況。?將 aIgAl 和其與系膜細胞共培養(yǎng)液上

2、清分別作用于體外培養(yǎng)條件永生化足細胞,觀察細胞形態(tài)變化；檢測 TNF-α 分泌情況；檢測足細胞結構分子 podocalyxin蛋白和核酸表達量的變化及蛋白表達分布情況。?將制備好的清熱止血方、雷公藤多苷片( GTW)、GTW+清熱止血方、強的松+肝素各組含藥SD 大鼠血清干預 HSPN 系膜細胞和足細胞損傷模型,觀察細胞形態(tài)變化和增殖情況；檢測 TNF-α 分泌情況和足細胞 podocalyxin 蛋白和核酸表達量和分布變化情況。④所得

3、結果均用均數(shù)±標準差(x±s) 表示,所有數(shù)據(jù)應用 SPSS18.0 軟件進行統(tǒng)計學處理,組間差異性比較采用單因素方差分析,兩組間比較用 t 檢驗, P<0.05 有統(tǒng)計學意義。
　　【結果】?HSPN 患者 IgA1 刺激系膜細胞 48h 后,各濃度梯度與對照組增殖情況比較, 0.25mg/ml 起效濃度, 1mg/ml 濃度時差異最明顯( P<0.01)；?藥物干預細胞損傷模型：在干預系膜細胞損傷模型增殖方面,清熱止血方+

4、GTW 抑制系膜細胞增殖明顯, 48 小時觀察與對照組比較具有統(tǒng)計學意義( P<0.05) ,優(yōu)于其他各組；干預系膜細胞損傷模型TNF-α 分泌方面,各組含藥血清均有統(tǒng)計學差異( P<0.05),其中又以清熱止血方+GTW 組干預效果最為顯著。?藥物干預足細胞損傷模型(上清組) TNF-α 分泌方面,各組含藥血清均有明顯抑制效果,而觀察藥物干預足細胞損傷模型( IgA1 組) TNF-α 分泌情況,發(fā)現(xiàn)含藥血清各組均能夠有效抑 TNF-

5、α 分泌,通過干預效果兩兩組間對比發(fā)現(xiàn),清熱止血方+GTW、GTW 和西藥組干預效果相當( P>0.05)；④通過 RT-PCR 檢測足細胞損傷模型 podocalyxin 核酸表達,我們發(fā)現(xiàn)無論是 IgA1 組還是上清組,各組含藥血清刺激 48h 后與對照組比較均具有統(tǒng)計學意義,而 IgA1 組以清熱止血方+GTW 含藥血清干預最為明顯,上清組強的松+肝素組、GTW 組、清熱止血方+GTW 組上調 podocalyxin 蛋白核酸表達

6、效果明顯,組間兩兩比較不具有統(tǒng)計學差異。
　　【結論】?患者 IgA1 在刺激系膜細胞增殖方面作用明顯,且均具有一定濃度依賴性；來源于患者的 aIgA1 刺激系膜細胞分泌 TNF-α 效果更為顯著；?清熱止血方+GTW 能夠有效干預系膜細胞增殖及 TNF-α 分泌,其對足細胞損傷模型 TNF-α 分泌的干預效果與強的松+肝素和 GTW 效果相當；?清熱止血方+GTW 能夠通過直接足細胞保護和抑制 TNF-α 分泌途徑上調足細胞