2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  糖尿病腎?。―iabetic nephropathy,DN)是糖尿?。―iabetes mellitus,DM)患者最主要的微循環(huán)并發(fā)癥發(fā)生于腎臟的表現(xiàn),主要累及腎小球,導(dǎo)致腎小球濾過率增高,蛋白濾過增加,出現(xiàn)大量蛋白尿,同時也是導(dǎo)致終末期腎?。‥nd stage renal disease, ESRD)的最主要原因。隨著DM患病人數(shù)的與日俱增,如何防止 DN發(fā)生及進(jìn)展越來越獲得普遍關(guān)注。既往很多實驗發(fā)現(xiàn)雷公藤多苷(

2、Tripterygium Wilfordii Polyglucosides, TWP)有較強的抗炎和調(diào)節(jié)免疫作用,其作用特點是多部位,多靶點,既能作用于T細(xì)胞、樹突狀免疫細(xì)胞等,又可抑制炎癥因子、粘附因子、趨化因子等分泌,從而達(dá)到治療多種自身免疫性疾病的效果。近幾年大量基礎(chǔ)實驗證實,TWP可通過抗炎、免疫抑制作用減輕足細(xì)胞和基底膜受損程度,從而降低尿白蛋白排出,緩解腎小球硬化程度,延緩DN的發(fā)展過程,但 TWP對 DM大鼠腎臟纖維化及細(xì)

3、胞外基質(zhì)( Extracellular matrix,ECM)沉積的作用機理尚不清楚。既往很多研究集中于 TGF-β1/Smad信號通路在心臟纖維化、肺纖維化及腎纖維化過程中的作用,但對TGF-β1/NF-κB信號通路對腎纖維化的作用機理尚未明確。因此,本研究以高糖高脂飲食聯(lián)合尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)行造模的DM大鼠為研究對象,采用ELISA方法、q-PCR方法、Western印跡方法及免疫組化方法,旨在研究TWP對TGF-β1/

4、NF-κB信號通路的影響,從而進(jìn)一步明確TWP對DM大鼠腎組織纖維化的作用。
  方法:
  清潔級雄性SD大鼠70只,按照隨機數(shù)字表,隨機選取10只作為正常對照組(NC組,n=10)喂養(yǎng)常規(guī)飼料。其余60只大鼠高糖、高脂飼料喂養(yǎng)8周后予尾靜脈注射鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ,30mg/kg)建立2型糖尿?。═2DM)模型。將造模成功后的大鼠再隨機分為模型對照組(DM)、根據(jù)應(yīng)用TWP劑量的多少進(jìn)一步分為低(

5、tripterygium glycosides,L-TWP,1mg/kg?d)、中(tripterygium glycosides,M-TWP,3mg/kg?d)、高(tripterygium glycosides, H-TWP,6mg/kg?d)劑量,每組各15只。造模成功后即開始灌胃, NC組和DM組以等量蒸餾水(2ml)灌胃,灌胃8周末處死取材。飼養(yǎng)動物期間按時記錄大鼠體重(BW)、血糖、24小時尿微量白蛋白(UMA)變化;處死大

6、鼠階段記錄 BW、腎重(KW);留取血標(biāo)本檢測血糖、肝腎功能、血脂及血常規(guī);采用ELISA法檢測大鼠血清中TGF-β1、NF-κBp65、IV型膠原(Collagen IV,COL-IV)、纖連蛋白(Fibronection,F(xiàn)N)、層粘連蛋白(Laminin,LN);留取腎組織標(biāo)本,光鏡下觀察大鼠腎組織腎小球病理改變;采用q-PCR法、Western印跡法分別從基因水平、蛋白水平檢測大鼠腎組織中 TGF-β1、NF-κBp65、COL

7、-IV、FN、LN水平,采用免疫組化法檢測上述各因子蛋白表達(dá)的腎組織定位情況。
  結(jié)果:
  1.與NC組相比,高糖高脂飼料喂養(yǎng)8周后,大鼠血甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、空腹胰島素(FINS)、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)和胰島β細(xì)胞功能指數(shù)(HOMA-β)高于NC組(P<0.05);STZ注射后大鼠較NC組大鼠體重降低,同時伴有多飲、多尿、多食等癥狀表明T2DM大鼠造模成功。
  2.一般指標(biāo):①體重、

8、血糖:與NC組相比,DM組大鼠造模后血糖顯著上升(P<0.05),體重顯著減輕(P<0.05);②腎重指數(shù)(KW/BW):與NC相比, DM組大鼠KW/BW明顯升高(P<0.05),TWP治療組中,KW/BW均有所下降(P<0.05),以H-TWP組下降最為顯著(P<0.05);③血脂:與NC組相比,DM組大鼠TG、TC水平顯著升高(P<0.05),TWP治療組未見顯著改變(P>0.05);④肝、腎功能、血常規(guī):大鼠肝、腎功能和血常規(guī)在

9、各組間均無明顯差異(P>0.05)。
  3.24h尿微量白蛋白(24h UMA):①與NC組相比,DM組大鼠UMA水平顯著升高(P<0.05);與DM組相比,TWP治療組大鼠UMA水平顯著降低(P<0.05),且呈劑量依賴性。
  4.各組大鼠腎小球病理形態(tài)學(xué)變化:NC組腎組織結(jié)構(gòu)正常;DM組HE染色可見腎組織內(nèi)大片炎性細(xì)胞浸潤,Masson染色可見腎組織出現(xiàn)明顯纖維化,PAS染色可見腎小球基底膜增厚。經(jīng)不同劑量TWP干預(yù)

10、后,上述病理改變明顯減輕,且呈劑量依賴性改善。
  5.采用ELISA法檢測大鼠血清中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN水平:①與NC組相比,DM組血清TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN含量明顯增多(P<0.05);與DM組相比,TWP治療組血清TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN含量顯著下降(P<0.05),且呈劑量依賴性下降。
  6.應(yīng)用q-PCR法

11、檢測大鼠腎組織中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN mRNA的表達(dá):①與NC組相比,DM組腎組織中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN mRNA表達(dá)水平顯著增多(P<0.05);與DM組相比,TWP治療組腎組織中 TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN表達(dá)水平顯著降低(P<0.05),且呈劑量依賴性降低。
  7.應(yīng)用Western印跡法檢測大鼠腎組織中TGF-β1

12、、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN蛋白的表達(dá):①與NC組相比,DM組腎組織中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN蛋白表達(dá)顯著增多(P<0.05);與DM組相比,TWP治療組腎組織中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN蛋白表達(dá)顯著下降(P<0.05),且呈劑量依賴性下降。
  8.應(yīng)用免疫組化法檢測大鼠腎組織中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN蛋白的表達(dá)

13、:與NC組相比,DM組腎小球內(nèi)可見標(biāo)記的TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN細(xì)胞浸潤(P<0.05);TWP組可見腎組織中TGF-β1、NF-κB p65、COL-IV、FN、LN表達(dá)明顯降低(P<0.05),M-TWP組、H-TWP組較L-TWP組下降更加明顯(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1. TGF-β1介導(dǎo)腎臟纖維化發(fā)生、發(fā)展過程,NF-κB炎性反應(yīng)信號通路所起的作用不容忽視。TWP干預(yù)組較

14、DM組大鼠KW/BW、24h UMA及病理改變均有所改善,且呈劑量依懶性。
  2.雷公藤多苷具有獨特抗炎、免疫抑制作用,可抑制系膜細(xì)胞的增生,改善腎小球基底膜電荷狀態(tài)抑制蛋白排出,減輕腎小球纖維化。
  3. TGF-β1及其活化的NF-κB炎性反應(yīng)信號通路共同介導(dǎo)ECM的合成,而且其又協(xié)同促進(jìn)IV型膠原(COL-IV)、纖連蛋白(FN)及層粘連蛋白(LN)合成,共同介導(dǎo)糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展過程。
  4. TWP

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