雷公藤多苷聯合小檗堿對糖尿病大鼠腎臟JAK-STAT通路的作用.pdf

1、目的:
　　糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）是糖尿病（Diabetes mellitus，DM）的主要微血管病變之一，也是導致終末期腎?。‥nd stage renal disease, ESRD）的最主要原因之一。DN的發(fā)病機制不清，有研究發(fā)現持續(xù)低度的炎癥反應的存在，在糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展中起非常重要的作用。近年研究發(fā)現兩面神經激酶（Janus Kinase，JAK）/信號傳導及轉錄激活因子（Si

2、gnal transducers and activators of transcription，STAT）信號通路參與了糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展。近年研究報道表明雷公藤多苷及小檗堿均具有降低糖尿病腎病患者尿蛋白水平的作用，但具體作用機制尚不明確。本研究應用2型糖尿?。╰ype2 diabetes mellitus， T2DM）的大鼠模型為研究對象，以雷公藤多苷（tripterygium wilfordii glycosides， TWP

3、）以及小檗堿（berberine，BBR）作為干預的藥物，探討不同劑量雷公藤多苷及小檗堿在T2DM大鼠腎臟JAK/STAT的信號通路的影響作用及其可能機制。
　　方法:
　　清潔級雄性SD大鼠一共130只，隨機選取其中10只SD大鼠飼以常規(guī)飼料，作為正常對照組；其余120只大鼠采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯合小劑量STZ（30mg/kg）尾靜脈注射誘導T2DM模型。將造模成功的SD大鼠隨機分為糖尿病對照組（DM）、低、中、高劑量TW

4、P組（TL,1mg/kg?d、TM,3mg/kg?d、TH,6mg/kg?d）、BBR及低、中、高劑量TWP聯合BBR組（BBR,150mg/kg?d、TBL，1mg/kg?d+150mg/kg?d、 TBM,3mg/kg?d+150mg/kg?d、 TBH,6mg/kg?d+150mg/kg），SD大鼠造模成功后即開始灌胃。觀察大鼠藥物灌胃前后不同時間點代謝指標的變化。采用ELISA方法檢測SD大鼠血清中ICAM-1和IL-6水平的變

5、化，采用qPCR方法檢測JAK2、STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6的mRNA表達量， Western blotting方法分別觀察p-JAK2、p-STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6在腎組織中的表達情況，應用免疫組織化學方法行ICAM-1和IL-6的蛋白表達定位及半定量分析。
　　結果:
　?。?）SD大鼠經過高脂高糖飼料喂養(yǎng)8周后，與NC組相比，高糖高脂喂養(yǎng)的SD大鼠血清TG、TC、FINS、HO

6、MA-IR和HOMA-β指數顯著升高(P<0.05)，但血糖無明顯變化（P>0.05）。STZ注射后大鼠的血糖較NC組顯著升高(P<0.05)，且應用TWP及BBR治療后未發(fā)生明顯變化（P<0.05）。各組大鼠的肝腎功能及血常規(guī)在灌胃8周末時，無明顯差異(P>0.05)。
　?。?）24h尿UMA水平：與NC組相比，DM組大鼠UMA明顯升高（P<0.05）， TWP、BBR、TWP聯合BBR組大鼠UMA較DM組呈劑量依賴性降低，且

7、以TM組、TH組、TBM組、TBH組降低最明顯（P<0.05）。
　?。?）ELISA方法檢測大鼠血清中ICAM-1和IL-6水平的變化：DM組大鼠血清中ICAM-1和IL-6的表達較NC組顯著增高（P<0.05），TWP、BBR、TWP聯合BBR組大鼠血清中ICAM-1和IL-6的表達較DM組SD大鼠呈劑量依賴性降低，且以TM組、TH組、TBM組、TBH組降低最明顯（P<0.05）。
　?。?）qPCR法檢測SD大鼠腎組織

8、JAK2、STAT3、SOCS1、ICAM-1和IL-6的mRNA表達量：DM組大鼠腎臟SOCS1、ICAM-1和IL-6 mRNA表達較NC組明顯升高（P<0.05），TWP、BBR、TWP聯合BBR組SD大鼠腎組織ICAM-1和IL-6 mRNA表達較DM組呈劑量依賴性降低，但SOCS1表達量在藥物干預后呈劑量依賴性上升（P<0.05），JAK2及STAT3的表達量在各組之間無顯著統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　?。?）Wes

9、tern Blotting法檢測大鼠腎組織p-JAK2、p-STAT3、IL-6、ICAM-1和SOCS1的蛋白表達：DM組大鼠腎組織p-JAK2、p-STAT3 IL-6、ICAM-1和SOCS1的蛋白表達量較NC組明顯升高（P<0.05），TWP組、BBR組、TWP聯合BBR組大鼠腎臟p-JAK2、p-STAT3、IL-6和ICAM-1蛋白表達較DM組呈劑量依賴性降低， SOCS1在各藥物干預后，隨著藥物劑量的提高而增高（P<0.0

10、5）。
　?。?）免疫組化法染色觀察大鼠腎臟ICAM-1和IL-6蛋白表達定位及半定量分析：DM組大鼠腎臟腎小球和腎小球細胞間質中可見大量 ICAM-1和 IL-6的表達，即大量棕黃色顆粒物的沉積，在腎小管也可以見到其表達，黃染顆粒較NC組明顯增多，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），單用TWP組、BBR組、TWP聯合BBR組大鼠腎臟ICAM-1和IL-6蛋白表達較DM組有不同程度減少，即棕黃色顆粒物及DM組明顯減少，且呈劑量依賴

11、性（P<0.05）。
　　結論:
　　1.2型糖尿病大鼠腎組織中JAK/STAT信號通路的激活可以使下游炎癥因子ICAM-1和IL-6的表達增多，進而導致糖尿病大鼠腎臟的損傷。
　　2.雷公藤多苷聯合小檗堿可以延緩2型糖尿病大鼠蛋白尿的進程，且呈劑量依賴性。
　　3.雷公藤多苷聯合小檗堿能夠抑制2型糖尿病大鼠腎組織JAK/STAT信號通路的激活，增高SOCS1的過表達，進而減少ICAM-1和IL-6炎癥因子的表達