脂肪因子網(wǎng)膜素-1的自分泌效應(yīng)與結(jié)腸癌發(fā)病的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　（1）以結(jié)腸癌患者的癌組織和癌旁組織為研究對象，檢測癌組織和癌旁組織中Omentin-1的表達(dá)和定位。
　　（2）以結(jié)腸癌細(xì)胞SW480為研究對象，通過體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞，檢測結(jié)腸癌細(xì)胞是否能夠自分泌脂肪因子Omentin-1。
　　（3）以結(jié)腸癌患者的癌組織和癌旁組織為研究對象，檢測Akt信號分子表達(dá)的變化；前炎癥因子TNF-α、IL-1β和血管生成因子VEGF-A的表達(dá)定位，了解Omentin-1參與結(jié)

2、腸癌發(fā)生的機制是否涉及Akt分子信號通路，結(jié)腸癌組織中Omentin-1表達(dá)是否與結(jié)腸癌微環(huán)境存在聯(lián)系。
　　方法：
　?。?）應(yīng)用實時熒光定量PCR方法檢測Omentin-1在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中的mRNA表達(dá)。采用Western Blot方法檢測Omentin-1在結(jié)腸癌組織和癌旁組織中的蛋白表達(dá)。免疫組織化學(xué)方法觀察Omentin-1蛋白的表達(dá)以及定位。
　　（2）通過體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞，應(yīng)用實時熒光定量PCR

3、方法檢測不同時間點細(xì)胞裂解液中脂肪因子Omentin-1 mRNA的相對表達(dá)量。使用ELASA試劑盒檢測不同時間點細(xì)胞上清液和細(xì)胞裂解液中脂肪因子Omentin-1蛋白的表達(dá)量。
　?。?）應(yīng)用Western Blot方法檢測各組織中pAkt/Akt信號分子蛋白的變化，以及與相應(yīng)組織中Omentin-1蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析。
　?。?）應(yīng)用免疫組織染色的方法觀察 TNF-α、IL-1β和 VEGF-A的在結(jié)腸癌組織和癌旁組織

4、中蛋白的表達(dá)定位，以及與相應(yīng)組織中Omentin-1蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　（1）結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織中Omentin-1 mRNA、Omentin-1蛋白的表達(dá)量均高于癌旁組織中的表達(dá)量，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（mRNA：0.983±0.105 vs5.381±1.250，P=0.014<0.05；蛋白：1.086±0.242 vs0.612±0.064，P<0.01）；電子顯微鏡下觀察，Omentin-1

5、蛋白經(jīng)過染色后呈棕黃色，陽性表達(dá)主要在結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞漿和細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)，癌旁正常細(xì)胞也存在少量表達(dá)。且結(jié)腸癌組織切片視野的平均光密度值高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（0.621±0.102 vs0.295±0.030，P<0.01）。
　　（2）結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞裂解液中可以檢測出脂肪因子Omentin-1 mRNA和蛋白的表達(dá)；細(xì)胞上清液中可以檢測出Omentin-1蛋白的表達(dá)，并且細(xì)胞裂解液中Omentin-1蛋白的表達(dá)量較上清

6、液中的更多，其表達(dá)均具有時間依賴性。
　　（3）結(jié)腸癌患者的結(jié)腸癌組織中pAkt/Akt蛋白表達(dá)量高于癌旁組織中表達(dá)量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（1.891±0.245 vs1.076±0.094，P=0.006<0.01）。通過Pearson相關(guān)分析顯示，Omentin-1蛋白的表達(dá)與pAkt/Akt蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.764，P＜0.01)，且具有較強的相關(guān)性，線性回歸分析表明，脂肪因子Omentin-1是pAkt/Akt

7、蛋白表達(dá)水平的影響因素。
　?。?）免疫組化染色后，電子顯微鏡下觀察：結(jié)腸癌組織中 TNF-α、IL-1β和 VEGF-A蛋白的表達(dá)明顯高于癌旁組織內(nèi)的表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（0.546±0.078 vs0.231±0.064，0.673±0.103 vs0.336±0.044，0.578±0.079 vs0.250±0.079，P＜0.01~0.05），但TNF-α、IL-1β的表達(dá)與Omentin-1的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)關(guān)系（

8、r分別-0.767和-0.334，P均＜0.05）。而與VEGF-A的表達(dá)未顯示出相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　?。?）結(jié)腸癌細(xì)胞能夠自分泌表達(dá)脂肪因子Omentin-1，可能通過內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌的途徑，參與結(jié)腸癌的發(fā)生、進(jìn)展。
　?。?）脂肪因子Omentin-1參與結(jié)腸癌發(fā)生的機制可能涉及Akt信號通路的激活。
　?。?）Omentin-1的表達(dá)與前炎癥因子 IL-1β、TNF-α存在負(fù)性相關(guān)，而與VEGF