甘露糖篩選系統(tǒng)在番茄轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用.pdf

1、在植物轉(zhuǎn)化系統(tǒng)中應(yīng)用較為廣泛的標(biāo)記基因包括抗生素抗性基因和除草劑抗性基因兩大類，常用的抗性基因包括nptⅡ、hpt和bar基因等。但是利用這些標(biāo)記基因的選擇體系都可能存在生物安全性問(wèn)題，因而培育無(wú)標(biāo)記基因及安全標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)基因植物已成為基因工程的重要目標(biāo)之一。 甘露糖選擇體系是一種正選擇體系，磷酸甘露糖異構(gòu)酶（PMI）是一種安全的標(biāo)記基因。為了獲得對(duì)腫瘤治療具有積極作用的aFGF的單鏈抗體，本實(shí)驗(yàn)以大腸桿菌manA基因作為選擇標(biāo)

2、記基因，利用甘露糖為選擇劑來(lái)獲得能夠表達(dá)aFGF單鏈抗體的轉(zhuǎn)基因番茄。我們首先通過(guò)七組對(duì)照實(shí)驗(yàn)確定甘露糖作為選擇劑的最佳濃度，然后分別構(gòu)建了植物表達(dá)載體pM390—scFv和pM390—E8—scFv（E8啟動(dòng)子為果實(shí)特異性啟動(dòng)子），構(gòu)建的雙元表達(dá)載體帶有一個(gè)單鏈抗體基因，載體上的大腸桿菌manA基因可以表達(dá)磷酸甘露糖異構(gòu)酶，因而在轉(zhuǎn)化過(guò)程中可以使用甘露糖作為選擇劑。通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們初步建立了PM1/甘露糖正選擇體系，切取7～9d苗齡的番茄