長鏈非編碼RNA-PVT1在結(jié)直腸癌組織中的表達及意義.pdf

1、目的:
　　大腸癌是嚴重威脅我國人民健康的惡性腫瘤之一。研究表明長鏈非編碼RNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，關(guān)于非編碼RNA在結(jié)直腸癌中的研究已成為當前的熱點。長鏈非編碼RNA-PVT1位于染色體8q24.21，是一個與腫瘤高度相關(guān)的區(qū)域，研究發(fā)現(xiàn)沉默Pvt1促進了細胞凋亡，且在結(jié)直腸癌細胞中Pvt1的表達水平是升高的。因此檢測結(jié)直腸癌組織長鏈非編碼RNA-PVT1的表達水平，分析比較 PVT1表達水平與癌組織分化程度、病理分

2、期的關(guān)系，為尋找新的結(jié)直腸癌標記物和治療靶點提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　第一部分實驗：收集大腸癌病人的臨床標本，分為癌組織及癌旁組織，提取相應組織的總RNA，取5ul總RNA提取液，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄反應，合成雙鏈互補 cDNA；用SYBR? Green Realtime PCR Master Mix試劑盒對PVT-1的轉(zhuǎn)錄水平進行檢測。
　　第二部分實驗：瓊脂糖凝膠電泳取5μl RT-PCR擴增產(chǎn)物，1μ

3、l6×loading buffer混合上樣，120V電壓電泳20 min，用Baygene BG-gdsAuto520凝膠成像系統(tǒng)分析儀紫外光檢測照相。
　　結(jié)果：
　　第一部分：76份病例標本中癌組織中PVT1表達水平是癌旁組織的3.1倍。低分化組與中分化組癌組織中目的基因表達水平有統(tǒng)計學差異，低分化組高于中分化組（P<0.05）。“III期、IV期”組癌組織中PVT-1表達水平明顯高于“0期、I期、II期”組（P<0.0

4、1）。II期組患者癌組織中PVT-1表達水平明顯高于I期，III期組癌組織中PVT-1表達水平明顯高于 II期，差異皆有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。PVT1表達水平與性別、年齡無關(guān)。
　　第二部分：凝膠電泳試驗證實癌組織中的cDNA含量高于癌旁組織。結(jié)論
　　1．癌組織中Pvt1的表達水平高于癌旁組織；
　　2．癌組織中Pvt1的表達水平與組織分化類型呈負相關(guān)；
　　3．Pvt1的表達水平與病理分期相關(guān)，分期越晚