2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文所研究的過氧化氫酶是由嗜熱子囊菌胞外分泌產(chǎn)生。過氧化氫酶是一種能夠高效催化分解過氧化氫的酶,廣泛應(yīng)用于食品消毒、臨床分析、醫(yī)學(xué)診斷以及紡織、造紙、制漿等工業(yè)。本文對嗜熱子囊菌發(fā)酵生產(chǎn)過氧化氫酶的條件進(jìn)行了優(yōu)化,所產(chǎn)粗酶經(jīng)初步分離純化后,研究其酶學(xué)性質(zhì)。利用大孔吸附樹脂對過氧化氫酶進(jìn)行固定化,研究其最優(yōu)固定化條件、固定化酶性質(zhì),并對其去除H2O2的應(yīng)用做了研究。 對搖瓶發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,最優(yōu)種子培養(yǎng)條件是:碳源為玉米

2、淀粉,氮源為蛋白胨,轉(zhuǎn)速200r/min,裝液量200mL(500mL搖瓶),培養(yǎng)52h。在基礎(chǔ)發(fā)酵階段,最優(yōu)條件為:10m/L的乙醇、20g/L的糊精為混合碳源,氮源為10g/L的蛋白胨,發(fā)酵培養(yǎng)基的初始pH為7.0,搖瓶裝液量為90mL(500mL搖瓶),分階段控制搖床轉(zhuǎn)速,酶活力最高達(dá)2267U/mL。在3L發(fā)酵罐中發(fā)酵時,最優(yōu)的發(fā)酵條件為:接種量6%(v/v),攪拌轉(zhuǎn)速200rpm,從發(fā)酵24h開始,每12h添加一次乙醇,每次添

3、加量為2mL(總添加量16mL)。發(fā)酵時間延長至116h,酶活最高達(dá)到2532U/mL。 采用過濾-超濾-硫酸銨鹽析-透析等步驟對粗酶液進(jìn)行初步的分離純化,研究酶學(xué)性質(zhì)。結(jié)果表明,粗酶液經(jīng)過分離純化以后,酶活回收率達(dá)到了59.3%,蛋白回收率30.2%,比酶活為4608 U/mg蛋白,純化了1.96倍。酶的最適反應(yīng)溫度為30℃,最適反應(yīng)pH為7.0,具有良好的耐熱耐堿性能。向發(fā)酵超濾酶液中添加一定量的甘油或者明膠,可以提高酶的貯

4、藏穩(wěn)定性。 選擇AB-8大孔吸附樹脂作為固定化載體,戊二醛作為交聯(lián)劑,最優(yōu)固定化條件為:吸附溫度35℃,pH7.0,吸附時間6h,加酶量970U/g(載體),戊二醛終濃度0.2%,交聯(lián)時間2h,交聯(lián)溫度4℃。在此條件下固定化過氧化氫酶的酶活收率達(dá)到45.2%。固定化酶的最適反應(yīng)溫度為35℃,最適反應(yīng)pH7.0。固定化酶的熱穩(wěn)定性,酸堿穩(wěn)定性都較游離酶有了一定的提高,且具有較好的操作穩(wěn)定性及貯藏穩(wěn)定性,固定化酶重復(fù)使用10次,酶活

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